刘地 ，高惠仙 ，燕平梅 ，李娜 ，李博 ，武晓英

1.太原师范学院生物系，山西晋中030619；2.太原师范学院生物系天然生物活性成分创制兽药工程中心，山西晋中030619

面对由新型病原体引发的传染病，缩短疫苗研发周期，尽早开发出安全、有效的疫苗仍是目前重要的研究方向。近年来，经皮给药系统发展迅速，成为仅次于口服和注射的第三大给药系统［1-2］。皮肤含有大量抗原提呈细胞能够捕捉抗原，将抗原转移至淋巴结并呈递给T 细胞，激活抗原特异性的T 细胞和B细胞，实现全身的免疫反应［3］。微针疫苗方便、安全、无痛，微针输送系统可提高给药效率和药物的生物利用度，降低疫苗成本和冷链运输要求［4-5］。此外，微针疫苗的接种不需要专业的医护人员，利于大规模的快速接种［6］。到目前为止，微针在药物输送、组织修复及美容保健等领域已得到了广泛应用［7-8］。

乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒（hepatitis B virus core protein virus-like particles，HBc-VLPs）是一种安全、有效的疫苗载体［9］，这种纳米级的载药平台为新型疫苗的研发提供了新的思路，在生物医学研究、疫苗、药物载体开发和基因治疗等领域具有广阔的应用前景［10-11］。本研究以定向改造的HBc-VLPs为载体，将模式抗原偶联于HBc-VLPs 表面的主要显性区域，制备具有纳米结构的重组抗原，再将抗原制成图层式微针疫苗，并对微针疫苗以及疫苗的免疫效果进行初步评价。

1 材料与方法

1.1 质粒及菌株 表达载体pET-28a（+）购自美国Novagen 公司；工程菌株 E.coli DH5α 和 E.coli BL21（DE3）购自美国Invitrogen 公司。

1.2 主要试剂及仪器 质粒DNA 提取试剂盒和DNA片段纯化试剂盒购自日本TaKaRa 公司；……