倪志强，王永恒，彭书旺，段珊珊，袁正泰

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是我国主要癌症负担之一，随着人们生活水平的提高以及饮食、生活方式的改变，CRC发病率及死亡率呈逐年增加的趋势[1]。虽然CRC的诊疗方法取得一定进展，但晚期CRC患者的预后仍然较差，这主要与CRC的复发、转移及耐药有关[2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是长度大于200个核苷酸且无蛋白编码能力的一类转录本，其在人类癌症进展中担当着调控因子的角色[3]。研究显示，LINC00909在胶质瘤中表达上调，LINC00909高表达与病理分期晚、预后差相关，下调LINC00909可抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭，从而抑制体内肿瘤生长[4]。有研究指出,CRC患者血浆中LINC00909表达水平升高，提示LINC00909可作为CRC临床诊断及预后监测的潜在肿瘤标志物[5-6]。但LINC00909在CRC发生发展中的作用机制目前尚不清楚。本研究通过检测结肠癌细胞中LINC00909表达水平，并研究下调LINC00909表达对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响，探索LINC00909的潜在靶基因及可能机制，以期为结肠癌的基因治疗提供潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 实验材料

正常结肠上皮细胞NCM460、结肠癌细胞HCT8、Caco-2及DLD-1均购自中国科学院上海细胞库；RPMI-1640培养基、MEM培养基、胎牛血清、青链霉素双抗均购自武汉普诺赛生命科技公司；TRizol试剂、miRNA反转录试剂盒、Taqman Universal Master Mix Ⅱ购自美国Invitrogen公司；Prime Script Ⅱ第一链合成试剂盒、SYBR green master mix购自大连Takara公司；miRNA模拟物(miRNA mimics)、miRNA抑制物(anti-miRNA)、小干扰RNA(si-RNA)、荧光素酶报告基因载体均购自上海生工公司；细胞计数试剂盒(cell counting kit，CCK)-8购自上海碧云天生物研究所；Transwell小室及基质胶购自美国康宁公司；二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)试剂盒购自美国Sigma公司；……