张 洁，杨 谭，卢永刚

（广西壮族自治区柳州市柳铁中心医院药剂科，广西柳州545007）

癌症是临床上常见的恶性肿瘤，进展快、死亡率高，给患者身心及经济上带来了巨大损害。肿瘤分子靶向药物的出现将癌症的治疗推向了一个前所未有的阶段。使用肿瘤分子靶向药物治疗肿瘤面临的最主要问题就是耐药，一些分子靶向药物可能同时具有多种耐药机制。靶向药物耐药的主要机制包括微环境的改变、基因突变、建立代偿信号通路、存在肿瘤异质性以及肿瘤对靶向药产生耐受性等。近年来，高通量功能性筛选技术为肿瘤研究提供了精准的基因学信息。而CRISPR⁃Cas9文库筛选技术是一种精准、简便、高效的基因编辑工具，为肿瘤相关耐药基因的功能学研究提供了新方法、新思路［1］。本文总结了CRISPR⁃Cas9文库筛选技术在肿瘤耐药基因筛选中的研究进展。

1 耐药基因筛选的现状

筛选耐药基因当前常用策略主要分为两种，即功能缺失型筛选及功能获得型筛选。RNA干扰（RNA interference，RNAi）在真核细胞中广泛存在，已广泛应用于功能性缺失基因的高通量筛选［2］。与cDNA文库相比，RNAi文库筛选虽具有简单、高效、高通量的优点，但仍存在一些问题［3］。无论是使用cDNA文库还是RNAi文库进行耐药基因筛选都不够精准。因此，寻找新的筛选工具对肿瘤耐药基因的发现及研究有着重要的意义。

2 CRISPR‑Cas9的生物学特性

CRISPR⁃Cas是细菌和古细菌在长期演化过程中为了对抗入侵的病毒及外源DNA进化形成的一种适应性免疫防御［4］。……