王 玲,孟伟民

(1青海省第四人民医院呼吸五科,西宁 810000;2青海省第四人民医院重症医学科)

结核病是人类三大传染性疾病之一,结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)是引起结核病的病原菌,可侵犯全身各器官,以肺结核最为常见[1]。巨噬细胞是人体免疫细胞,是Mtb侵入机体的主要靶细胞,在Mtb感染宿主时,其可以通过吞噬作用、自噬、凋亡等机制对细胞内Mtb进行清除[2]。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在免疫反应和免疫逃逸中有重要作用,广泛分布于人体各种细胞表面[3]。机体在感染Mtb之后,巨噬细胞和树突细胞上的TLRs能够特异性识别Mtb上的病原体相关模式分子(pathogen associated molecular pattern,PAMP),促进细胞因子的合成与释放,诱导机体产生获得性免疫反应[4]。TLR4能够通过激活髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 8,MyD88)依赖性通路和MyD88非依赖通路在Mtb感染巨噬细胞中发挥作用[5]。miRNA与细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡等过程有关,多个研究表明miRNA通过调控TLR4通路调节巨噬细胞抗Mtb感染过程[6-8]。TLR4是miR-20a的一个下游靶基因[9],对miR-20a靶向调节TLR4信号通路在巨噬细胞抗Mtb感染的作用还不清楚。因此本研究通过检测巨噬细胞感染Mtb后miR-20a的表达,分析miR-20a靶向TLR4通路在巨噬细胞抗Mtb过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

THP-1人单核细胞株(SCSP-567),购自于中国科学院细胞库;H37Ra Mtb菌种,购自于美国BD公司;佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)(货号:P8139)购自于美国Sigma公司;Lipofectamine 3000试剂盒(货号:L3000008),购自美国Invitrogen公司;RNAiso plus、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ(货号:9108Q、RR037、RR820Q),购自日本TAKARA公司;胎牛血清、青霉素-链霉素、RPMI-1640培养基、消化胰酶(货号:10099,15070063,61870036,25200056)购自美国Gibco公司;双荧光素酶报告基因检测试剂盒(货号:KFS303),购自北京百奥莱博科技有限公司;Bcl-2、Bim、TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋……