钟琦，盛豪，郭俊

（1南通大学第四附属医院神经外科，江苏盐城224001；2南通大学医学院）

脑胶质瘤是常见的中枢神经系统恶性肿瘤，约占恶性脑肿瘤81%[1]。脑胶质瘤恶性程度高，预后差，高级别胶质瘤生存时间仅1年左右[2]。胶质瘤的治疗方法主要为手术切除辅以放化疗，近年来出现了基因靶向治疗、免疫治疗等新的治疗方案，但化疗仍是决定患者预后的重要手段[3-4]。用于胶质瘤的化疗药物必须具有透过血脑屏障的能力，常见的化疗药物较难发挥作用[5]。青藤碱（Sinomenine，SIN）是从防己科植物青风藤及毛青藤根茎中提取的生物碱单体，在肺癌、胃癌、肝癌等肿瘤中具有抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用[6-8]。本研究探讨青藤碱对胶质瘤细胞SHG-44增殖和侵袭的影响，希望能为胶质瘤的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料人脑胶质瘤细胞SHG-44（中国科学院细胞库/干细胞库），青藤碱（Sigma-Aldrich），DMEM高糖培养基（Gibco），胎牛血清（Wisent），胰蛋白酶（Bio-Froxx），CCK-8试剂盒（Med Chem Express），Transwell小室（Corning），P-ERK抗体、P-JNK抗体和P-STAT3抗体（Cell Signaling Technology），羊抗兔IgG（Biosharp）。

1.2 实验方法

1.2.1 SHG-44细胞培养：细胞从液氮中复苏后传代。取对数生长期并长满皿底的细胞，PBS洗涤2次，用0.25%胰蛋白酶消化，然后以含10%胎牛血清的DMEM终止消化。离心后按1∶3进行传代，使用含10%胎牛血清的DMEM，在37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，培养约2天可传下一代。

1.2.2 CCK-8检测细胞增殖：取对数生长期细胞，制成细胞悬液，以5×104个/mL接种于96孔板，每组设置5个复孔。培养24 h后更换含不同浓度（0 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L）青藤碱的完全培养基，分别于12 h，24 h和36 h进行吸光度检测。弃去旧培养基，每孔加入100μL含10%CCK-8的DMEM，37℃培养箱内孵育1 h，使用酶标仪检测450 nm波长的吸光度，计算细胞增殖。……