黄妙琳，梁均和，邹健祺，冯敏超，蔡宏珠，钟锡安

江门市疾病预防控制中心，广东 江门 529300

HIV感染者由于个体自身免疫状况不同，对HIV抗原的反应性也不同，抗体产生时间和对HIV抗原的免疫应答强弱也产生差异，免疫印迹(western blotting, WB)实验中表现为WB条带的数量和颜色深浅存在差异[1]。人感染HIV病毒后，HIV主要攻击人类的免疫系统，导致机体免疫水平下降，特别是CD4+T淋巴细胞会出现进行性或不规则下降。CD4+T淋巴细胞指标对于了解机体的免疫状态、疾病进展、治疗艾滋病及预防各种机会性感染具有重要指导意义,因此从不同的HIV感染分期了解血清学和免疫学的变化规律很有必要。本文对226例不同免疫状况下的HIV-1抗体阳性者的WB带型特征变化进行分析，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

血清标本来源于2019年经本单位艾滋病确证实验室诊断为HIV-1抗体阳性且有首次CD4+T淋巴细胞计数结果的226例患者。

1.2 方法

采用WB检测HIV抗体(新加坡Genelabs Diagnostics公司的免疫印迹试剂盒)，通过BD FacsCalibur流式细胞仪开展CD4+T淋巴细胞计数检测,所有试剂均在有效期内使用，按照试剂盒说明书操作，并严格遵从《全国艾滋病检测技术规范》(2020年修订版)[2]判定标准综合判断结果。由两个专职检验人员共同对WB结果条带判读。

依据《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》(WS293-2019)[3]，以CD4+T淋巴细胞计数检测结果对机体不同程度的免疫缺陷进行分级：CD4+T淋巴细胞计数≥500/μL：无免疫缺陷；350～499/μL:轻度免疫缺陷；200 ～349/μL:中度免疫缺陷；<200/μL:重度免疫缺陷。HIV感染分期主要依据：CD4+T淋巴细胞计数>500/μL为HIV感染早期；200～500/μL为HIV感染中期，<200/μL为AIDS期。

1.3 统计学方法

用SPSS 19.0软件进行统计分析，不同疾病分期WB带型比较使用Pearson2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况

226例患者中男180例(79.65%)，女46例(20.35%)，男 ∶女为4 ∶1；年龄16～83岁。

2.2 WB带型分析

226例HIV-1抗体阳性者的条带统计分析见表1。WB带型以全带和次全带(缺少p55)为主，全带占47.79%(108/226)，次全带占24.78%(56/226)，其中抗env基因编码的包膜蛋白抗体检出率最高，gp160、gp120均为100%、gp41为99.56%。抗pol基因编码的核酸内切酶和聚合酶抗体检出率也普遍较高，p66为96.90%，p51为93.36%，p31为91.59%。抗gag基因编码的核心蛋白抗体检出率除p24(98.67%)之外，其它检出率较低，p55为50.44%，p17为63.72%。

表1 226例HIV-1抗体阳性者带型统计分析Tab.1 Analysis of bands in 226 HIV-1 antibody positive patients

2.3 首次CD4+T淋巴细胞计数检测结果

226例HIV-1抗体阳性者首次CD4+T淋巴细胞计数最大为925/μL，最小为3/μL。HIV-1抗体阳性者首次CD4+T淋巴细胞计数小于200/μL，即重度免疫缺陷者83例(36.73%)，中度61例，轻度45例，无免疫缺陷者37例，详见表2。

表2 226例HIV-1抗体阳性者首次CD4+T淋巴细胞计数检测结果Tab.2 The first detection results of CD4+T lymphocyte count in 226 HIV-1 antibody positive patients

2.4 HIV-1抗体阳性者不同疾病分期WB带型分布

不同免疫状况组WB带型中，p55和p17检出率较低，全带、p55和p17检出率从HIV感染早期、HIV感染中期到AIDS期检出率逐渐减低，差异均有统计学意义(2值分别为92.91、8.37、14.62，P<0.05)，见表3。

表3 HIV-1抗体阳性者不同疾病分期WB带型分布 例(%)Tab.3 WB band pattern distribution of HIV-1 antibody positive subjects with different disease stage Case(%)

3 讨论

目前国内大多数单位均以免疫印迹法作为HIV抗体确证的金标准。李楠等[4]认为WB带型的分析有利于感染者病程的诊断，可作为HIV感染早、中和晚期的辅助诊断。gp160和p24是感染早期最早出现的，因此单单出现gp160和p24是HIV早期感染的重要提示;进入AIDS期，HIV病毒大量复制消耗抗体，表现为p24条带的缺失；WB带型若为全带，提示HIV处于活跃复制期。本研究中p24检出率为98.67%，全带占47.79%。

抗体的产生受机体免疫水平的影响，随着HIV感染者病程的进展，可以检测到抗HIV特异抗体的数量和种类也会发生变化。从本文分析得出WB条带内在关联：①全带和次全带检出率较高;②同一基因编码的蛋白抗体检出率有一定的关系，gp160和gp120一般都是同时出现，后出现gp41，gp160是包膜蛋白的前体，裂解成gp120和gp41，没有gp160出现，不可能有gp120和gp41;③抗pol基因编码的p66、p51和p31，一般都是同时出现，三者检出率和关联度较高。本实验结果与张佳峰等[1]研究结果基本一致。抗env基因编码的蛋白抗体检出率最高，平均比达99.85%；抗pol基因编码的核酸内切酶和聚合酶抗体检出率次之，平均比达93.95%；抗gag基因编码的核心蛋白抗体p55检出率最低，只有50.44%，与有关报道[5]结果一致。p17检出率为63.72%，与张佳峰等[1]报道的84.68%有一定差距，原因可能是WB带型结果由肉眼判读，不同检验人员对反应弱的条带判读不同，提示有必要推出适合我国人群带型反应强度的判断标准，有利于减少主观判断差异。

CD4+T淋巴细胞计数检测是进行HIV感染进展和判断疗效的主要检测依据，反映感染者出现不同程度免疫功能缺陷。随着HIV病毒的侵犯，CD4+T淋巴细胞计数减少。根据CD4+T淋巴细胞计数小于200/μL的HIV-1抗体阳性者可归为AIDS期的标准[3]，结果显示，HIV-1抗体阳性者确诊时，超过三成(36.73%)患者被发现时已进入AIDS期，感染时间较长，个体重度免疫缺陷，这与魏微[6]研究结果一致。本研究表明，不同疾病期分组WB带型不同：env带型和pol带型的出现率不受疾病病程的影响。全带、p55和p17检出率从HIV感染早期、HIV感染中期到AIDS期逐渐减低，差异均有统计学意义，这与丘凤兰[7]、陈会超等[8]研究结果基本一致。已有研究表明gag带p55和p17的转阴可作为疾病发展为AIDS期的一个潜在判别依据[9]，推测抗gag抗原具有抗艾滋病的保护功能，高水平的抗gag蛋白抗体与艾滋病潜伏期长有关，而低水平可能会导致艾滋病的发病。

综上，本研究提示，临床上部分患者被确诊为AIDS时，已感染较长时间，机体的免疫功能已受到损害，从而影响抗病毒治疗的效果。因此，应做好宣传教育工作，动员社会组织参与AIDS防治工作，完善监测体系，扩大检测覆盖面；同时，应尽快创造条件实施HIV病毒载量实验，对HIV-1阳性者展开检测，监测疾病进展。