张卫东 邱月 刘倩 杨伏猛

南京医科大学康达学院附属连云港第二人民医院检验科 222006

胱抑素C（cystatin C，Cys C）是由 120 个氨基酸残基组成的一种碱性非糖基化蛋白，由人体所有的有核细胞所生成，能够自由通过肾小球滤过且全部被近曲小管重吸收，是评估肾功能损伤的敏感指标［1-2］。有研究显示：Cys C 与急性肾损伤、慢性肾脏疾病等均有密切关系，且能够比血清尿素、肌酐更早期反映肾功能的改变［3-5］。参考区间作为实验室结果的重要组成部分，是判断各项指标是否正常的重要依据［6］，且国际临床化学和检验医学联合会（IFCC）早在1986 年就提出实验室建立生物参考区间的建议，但是由于当时实验室条件受限、成本支出较高等因素，未能在实验室中广泛推行［7］。目前，不同实验室间所引用的参考区间来源存在一定差异，当前实验室主要引用了卫生行业标准、临床检验操作规程、试剂盒自带的说明书等提供的参考区间，导致不同实验室的判断标准存在差异，且未形成一致标准［8-9］。基于上述情况，笔者认为实验室有必要结合区域人群特征和检测方法学等因素，建立适宜的参考区间，以充分发挥Cys C的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 根据本研究纳入标准，应用完全随机化方法将2019 年9—10 月于本院健康体检人员978 例纳入本研究，男 486 例、女 492 例，年龄 20～79 岁。本研究根据CLSI C28-A3 文件［10］和卫生行业标准《临床常用生化检验项目参考区间第5 部分：血清尿素、肌酐》［11］确定分组依据，按性别分为男性组（20～79 岁）、女性组（20～79 岁）；再按年龄分为：20～59 岁男性、60～79 岁男性、20～59 岁女性、60～79 岁女性。根据各组数据是否存在统计学差异，进行合并或分组建立其参考区间。

1.2 纳入标准 ⑴年龄分布20～79岁，血压≤139/89mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）；⑵血液临床生化指标：肝功能、肾功能、血糖、血脂均处于正常参考区间；⑶无肝脏、肾脏、心脑血管等系统疾病；⑷无代谢性疾病；⑸尿液常规各项指标均正常。

1.3 标本采集 嘱受检者在采血前12 h 禁食（除水外，不得食入其他食物），采集清晨空腹静脉血5 ml（不添加抗凝剂的血清管），并于2 h内完成标本的离心和血清分装，排除有溶血、黄疸和乳糜的标本，筛选出符合要求的标本，置于-80℃条件下保存待检。

1.4 仪器和试剂 贝克曼AU5821 全自动生化分析仪（美国贝克曼公司），试剂均为其配套产品。检测所需试剂：Cys C 检测试剂盒（批号AUZ4025），检测原理为颗粒增强散射免疫比浊法；生化多项质控品（批号M607702、M607703）。实验室相关仪器均按照标准操作规程进行维护和保养，确保检测系统分析性能符合要求。

1.5 统计学处理

1.5.1 离群值检验［12］采用Dixon 法进行离群值的检验，将全部数据进行排序，把疑似的离群数据与其相邻数据之差（D）除以全距（R），如果比值≥1/3，则确定为离群值，并将其剔除。重复上述步骤，直到全部离群值被剔除。

1.5.2 参考区间分组或合并的判断 根据CLSI C28-A3文件［10］和卫生行业标准《临床实验室检验项目参考区间的制定》［13］中建议的方法，采用Z检验方法进行统计处理，Z检验计算公式为分别是两组的均值，s1和s2分别是两组的标准差，n1和n2分别是两组的样本量。

1.5.3 统计学分析 应用SPSS 20.0 软件进行统计学处理，计量资料采用Kolmogorov-Smirnov方法检验其是否符合正态分布，偏态分布数据以中位数（四分位数间距）［M（IQR）］表示，以P＜0.05 表示研究结果差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 血清Cys C 的检测结果在性别方面的分布情况本研究显示：本地区健康成人血清Cys C 的结果分布性别上差异有统计学意义（Z=10.88，Z*=6.06，P＜0.05），且成年男性血清Cys C 的检测结果显著高于成年女性。因此，血清Cys C的参考区间的建立需要依据性别进行分组，见表1。

2.2 血清Cys C 的检测结果在年龄方面的分布情况本研究结果显示：本地区健康成年男性血清Cys C 的检测结果在年龄方面差异具有统计学意义（Z=13.38，Z*=4.27，P＜0.05）；同时，本地区健康成年女性血清Cys C 的检测结果在年龄方面的差异也具有统计学意义（Z=13.83，Z*=4.30，P＜0.05）。因此，血清Cys C 的参考区间的建立需要依据年龄进行分组，见表2。

表2 相同性别、不同年龄组血清Cys C水平的Z检验结果

表1 不同性别血清Cys C水平的Z检验结果

2.3 健康成人血清Cys C 的参考区间 综合上述研究结果，本研究显示：本地区健康成人Cys C 检测结果的分布在性别、年龄方面差异均有统计学意义，因此需要根据性别和年龄的不同分别建立其参考区间，且Cys C 的检测结果呈偏态分布，故取双侧95%（P2.5～P97.5）建立参考区间。本研究应用颗粒增强散射免疫比浊法建立的健康成人血清Cys C的参考区间为：20～59岁男性0.61～1.01 mg/L，60～79岁男性 0.68～1.65 mg/L，20～59 岁女性 0.54～0.93 mg/L，60～79岁女性0.66～1.31 mg/L。见表3。

表3 健康成人血清Cys C检测结果分布情况(mg/L)

3 讨 论

Cys C 是一种广泛分布于生物体中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，其体内的浓度水平主要受肾小球滤过率影响，而不受炎症、发热、饮食等外因影响，因此是反映肾小球滤过率的一项敏感指标［14］。参考区间是临床医生判断人体指标是否正常的度量依据，故实验室需明确所提供的参考区间的适用性和局限性，以确保各项指标被正确、合理地应用［15］。但由于参考区间的建立受到多因素的影响，如设计标准、工作量大、成本高、经济效益不显著等，且研究结果与人群分布、生活习性、地域差异等密切相关，进而导致不同实验室间的参考区间存在不一致现象［16］。因此，结合本地区人群特征和实验室的方法学特点，建立适宜的血清Cys C 的参考区间，对于临床肾脏相关疾病的诊断与预后评估显得至关重要。

本研究通过纳入标准对参考个体进行了严格筛选，共有978 例体检健康成人纳入本研究。通过对研究对象血清Cys C 测定结果的统计分析发现，健康成人血清Cys C 水平在性别上差异具有统计学意义（P＜0.05），且成年男性的血清Cys C 检测结果显著高于成年女性。胡勤辛等［17］针对50岁以上的中老年人Cys C的分布情况进行的研究也显示：健康中老年人的血清Cys C 存在性别差异，且男性血清Cys C 浓度高于女性。殷明刚和余建洪［18］研究也证实：健康人群血清Cys C 的浓度分布存在明显的性别差异。本研究与上述学者的研究基本一致，均表明男性与女性血清中Cys C的含量差异有统计学意义。此外，本研究又根据年龄进行了统计学分析，分析其是否在年龄方面存在统计学差异，且本研究显示：健康成人血清Cys C 的浓度分布亦存在年龄上的差异，且随着年龄的增长，血清Cys C 的水平存在上升的趋势。刘长金等［19］研究也证实：血清Cys C的分布存在性别和年龄上的差异，且不论是男性或女性，其血清Cys C 的浓度均随着年龄的增加而升高。

基于本研究结果，依据性别、年龄分组并应用颗粒增强散射免疫比浊法建立的健康成人血清Cys C 的参考区间，分别为 20～59 岁男性 0.61～1.01 mg/L，60～79 岁男性 0.68～1.65 mg/L，20～59 岁女性 0.54～0.93 mg/L，60～79 岁女性0.66～1.31 mg/L。He M 等［20］也进行了健康成人 Cys C 的参考区间的单中心研究，该研究认为健康成人血清Cys C 的水平在性别上的差异不具有统计学意义，其依据年龄分组建立的参考区间为 18～49 岁 0.73～1.17 mg/L，50～79 岁0.73～1.49 mg/L。Weinert LS等［21］将97名志愿者纳入研究，其结果显示：18～70岁健康成人血清Cys C的浓度不存在性别差异。上述结果与本研究存在一定差异，进一步分析其可能的原因是：⑴三者均为单中心研究，设计的研究对象均较为单一，且在人群特征、地域分布上存在一定差异；⑵可能存在一定的抽样误差，3项研究所纳入的研究对象的数量存在显著不同，其总体代表性有待深入研究；⑶方法学上的差异，不同的检测系统之间，需要开展一系列比对试验，进而确定两者间是否具有一致性。此外，本研究还存在一定的局限性：本研究纳入的研究对象数量虽然达到了最低要求（每组：n≥120），但仍需纳入更多志愿者以增加总体的代表性；其二，本研究为单中心试验，群体代表性有限。因此，今后的研究中，笔者将关注这方面存在的不足，使得研究结果更具有科学性和实用性。

综上所述，本研究基于连云港地区人群以性别、年龄等特点分别建立了血清Cys C 的参考区间，与试剂说明书提供的单一参考区间相比，本参考区间更具有科学性和针对性，能够为本地区人群的健康筛查以及肾脏相关疾病的辅助诊断、治疗检测等方面提供潜在的应用价值。同时，从本研究结果可以看出实验室自建参考区间的必要性，故建议实验室结合自身检测系统的方法学、人群分布情况等因素，建立临床检验各指标的生物参考区间，以期发挥其重要的临床应用价值。

利益冲突：作者已申明文章无相关利益冲突。