余利星，翟 睿，楚占营，3，金有训，武利庆，米 薇，龚晓云，谢 洁，江 游，戴新华，方 向，俞晓平

(1.中国计量大学生命科学学院，浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室，浙江 杭州 310018；2.中国计量科学研究院，质谱仪器工程技术研究中心，前沿计量科学中心，北京 100029；3.华东理工大学化学与分子工程学院，上海 200237)

临床体外诊断生物标志物中，蛋白质类标志物约占10%～15%[1]。目前，针对蛋白质的检测方法有时间分辨荧光免疫分析法[2-3]、酶联免疫吸附法[4]、LC-MS/MS法[5-6]、免疫散射比浊法[7]和毛细管电泳结合紫外、质谱技术[8]等，其中基于抗原-抗体反应的免疫分析法是临床蛋白质定量分析应用最广泛的方法[9-11]。然而，由于存在抗体特异性差异、蛋白质结合位点差异、基质干扰、假阳性结果等问题，很难得到准确可靠的蛋白质定量分析数据，造成不同国家、不同实验室蛋白质定量分析结果不可比对，临床诊断准确性无法保证[12-13]。因此，建立高准确度的蛋白质定量分析方法是必要的。

同位素稀释质谱法(isotope dilution mass spectrometry，IDMS)具有准确性高、重现性好等特点，已成为蛋白质质谱定量分析的首选方法[14-16]。该方法将已知质量的同位素标记肽段或蛋白质作为内标加入待测样本中，通过质谱仪测定同位素丰度比例，从而计算目标蛋白质含量。然而，以同位素标记肽段为内标的方法，由于标记肽段添加时间较晚，且理化性质与目标蛋白质相差较大，由蛋白质降解、酶切不完全以及蛋白样品损失带来的定量误差无法避免[17]。因此，以同位素标记蛋白质作为内标的方法是更可靠的。……