李皇保，周俊，赵凤庆，吴晓俊，闵捷

（嘉兴市第一医院/嘉兴医学院附属第一医院 肝胆外科，浙江 嘉兴 314000）

胆囊癌起病隐匿、发展迅速、预后较差[1]。虽然手术可以改善患者，但仍不理想[2]。在现有治疗方案的基础上探讨胆囊癌发展的分子机制，寻找潜在的化学治疗靶点具有重要意义。阿司匹林是非甾体抗炎药，国内外多项研究提示其可改善肝癌[3]、结直肠癌[4]、乳腺癌[5]及胰腺癌[6]的预后，可以降低胆囊癌的发病风险[7]。但是阿司匹林在胆囊癌中的具体作用机制目前国内外相关报道很少。本研究旨在通过阿司匹林干预胆囊癌细胞株GBC-SD中Janus酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription 3，JAK/STAT3）信号通路中关键分子STAT3的表达水平及磷酸化水平，观察阿司匹林对胆囊癌细胞凋亡、增殖的影响，以及胆囊癌细胞凋亡、增殖与STAT3、磷酸化STAT3（pSTAT3）、髓细胞白血病因子-1（myeloid cell leukemia-1，Mcl-1）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的关系，探讨阿司匹林对胆囊癌细胞株凋亡、增殖影响的潜在分子机制，为胆囊癌的化学治疗提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 主要材料

GBC-SD细胞系（中科院细胞库），1640 培养基（Gibco公司），10%胎牛血清（Biowest），DMSO、噻唑蓝（MTT），阿司匹林（Sigma），0.25%胰酶-EDTA（Procell），VEGF抗体、MCL-1抗体（Sigma），STAT3抗体、磷酸化STAT3抗体（Abcam），Trizol液（Biosharp），逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）试剂盒（VAZYME），凋亡试剂盒（eBioScience），STAT3激动剂（Colivelin，MedChemExpress）。

1.2 细胞培养

复苏后的细胞于含10%胎牛血清的1640培养液中培养（37 ℃、5% CO2）。当细胞长满培养皿80%～90%，0.25%胰酶消化细胞，用新的培养基将细胞重悬，将细胞按适当比例传代，约2～3 d传代1次。

1.3 细胞增殖检测

MTT法。取对数生长期细胞，接种在96孔不含胎牛血清的平……