王玥元，赵 洁，田 芳，周庆云，石清芳

脉管癌栓与肿瘤患者的术后辅助治疗及预后关系密切。近年多采用免疫组化CD31/D2-40标记血管、淋巴管内皮细胞，然而仅使用单项的免疫组化标记，仍无法确定脉管内细胞团是否有癌细胞，免疫组化鸡尾酒双染法是一种可以在组织中同时标记两类不同抗原的方法，可同时双染脉管内皮细胞和其内癌细胞[1-2]。本实验联合检测CD31/D2-40和上皮细胞标志物(CKpan)，分别行HE染色、免疫组化单染CD31/D2-40、鸡尾酒双染CD31/D2-40/CKpan，分析鸡尾酒双染法在脉管癌栓病理诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料收集2013年6月～2019年9月甘肃省妇幼保健院接受手术且经病理筛查有可疑脉管癌栓(排除淋巴结有转移者)的子宫颈癌48例、子宫内膜腺癌30例、乳腺癌40例，标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片，挑选有疑似脉管癌栓的切片，同时行HE染色、免疫组化单染CD31/D2-40、鸡尾酒双染CD31/D2-40/CKpan。

1.2 试剂及仪器CD31、D2-40、CKpan(AE1/AE3)鼠抗人单克隆抗体均购自福州迈新公司，鸡尾酒双染试剂盒购自美国罗氏公司。使用Ventana Benchmark XT免疫组化染色平台。

1.3 染色方法

1.3.1免疫组化单染 65 ℃烤片1.5 h，烤片后贴标签上机开始脱蜡(EZ)，碱性修复液(CC1)99 ℃ 30 min修复后，滴加一抗CD31/D2-40，CD31于37 ℃孵育32 min，D2-40于37 ℃孵育40 min，加二抗试剂(ultraView universal DAB kit)进行反应，呈棕色(二抗HRP multimer和DAB+H2O2的孵育时间均为8 min)，加入苏木精和Bluing返蓝液衬染，程序结束取出切片，梯度乙醇脱水至二甲苯，中性树胶封固。

1.3.2鸡尾酒双染 玻片完成烤片贴标签上机后开始脱蜡(EZ)，碱性修复液(CC1)99 ℃ 30 min修复，滴加一抗CD31/D2-40，CD31于37 ℃孵育32 min，D2-40于37 ℃孵育40 min，加入二抗试剂(ultraView universal DAB kit)进行反应，呈棕色(二抗HRP multimer和DAB+H2O2的孵育时间均为8 min)，反应结束升温至95 ℃变性4 min。……