张竞文，黄菱燕，秦 憬，吕怀盛，景 丽

胃癌是人类常见的恶性肿瘤，其预后与肿瘤分化程度、转移等密切相关。低分化胃腺癌与高分化胃腺癌相比，侵袭性更强、预后更差[1-4]。近年研究提示，细胞内钙离子水平影响细胞周期、能量摄取，并且参与调节癌细胞的增殖、浸润、转移等[3,5]。钙依赖性钙蛋白酶家族(Calpain)是调控细胞钙离子的重要成分，该家族包括Calpain-1与Calpain-2[3,6]。研究显示，Calpain-1高表达可促进口腔鳞状细胞癌浸润和转移[6]。Hes1基因是Notch1信号通路的靶基因，在维持细胞的未分化状态、分化方向中发挥重要作用[1,4,7]。已有研究显示，Notch1信号通路参与胃癌细胞增殖能力的调节[1]；Hes1在胃癌浸润和转移过程中发挥作用，胃癌组织浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分期均与Hes1高表达相关[1-2]；在进展期胃癌以及侵袭能力强的胃癌细胞系也有比较高的Hes1表达[7]。目前，Hes1基因参与胃癌进展的分子机制尚不清楚，Notch1/Hes1对胃癌细胞钙离子的影响有待于进一步分析。本文采用免疫组化、基因沉默、Transwell、Flou-4、Western blot法检测低分化胃腺癌、MGC-803胃癌细胞中Notch1/Hes1蛋白表达及其对钙离子水平的影响，探讨Notch1/Hes1对胃癌细胞钙离子水平及侵袭力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料收集2016～2018年宁夏医科大学总医院收治的低分化胃腺癌及癌旁正常组织各32例。MGC-803人低分化胃癌细胞株购自北京北纳生物公司。实验所用试剂购自北京中杉金桥公司和武汉博士德公司，主要包括Notch1、Hes1、Calpain-1(Abcam 公司)，vimentin、E-cadherin、β-actin兔多克隆抗体(Proteintech 公司)，RPMI 1640培养基、青链霉素、胰蛋白酶-EDTA消化液、胎牛血清(HyClone公司)，Flou-4 AM钙离子检测试剂……