赵家琪 ，郝 吉，马远任，邓憬童，黄慧琪，杨新洲*，庞克坚

(1.中南民族大学，湖北 武汉 430074；2.和田维吾尔药业股份有限公司，新疆 和田 848200）

赶山鞭Hypericum attenuatumChoisy 为藤黄科金丝桃属植物,又名稳心草、女儿茶,为我国民间常用中药［1］,具有清热、解毒消肿、抗炎抗抑郁等功效［2-3］,表明该属植物具有广泛的药用基础。前期研究者用多种现代色谱技术对赶山鞭活性部位的化学成分进行系统研究,已分离鉴定了黄酮类、挥发油类、PPAPs 类以及其他类化合物［4-5］。本课题组对采自吉林长春赶山鞭化学成分进一步系统的分离和纯化,从其乙酸乙酯部位中分离得到15 个化合物,除了化合物1、6、12、15 外,其余11 个化合物均为首次从该植物中分得。

1 材料

Bruker DRX-600 MHz 核磁共振仪 (德国Bruker 公司)；Waters ACQUITY SQD MS 液相质谱联用仪、Waters 2535 半制备型HPLC 仪 (美国Waters 公司)；Thermo C18柱 (150 mm×10 mm,5 μm,美国Thermo 公司)；Phenomenex Luna C18柱(250 mm×10 mm,5 μm,美国Phenomenex 公司)；GF254薄层硅胶板(200～300、300～400 目,烟台江友硅胶开发有限公司)；Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶(美国Amersham 公司)；CHP-20PMCI 树脂(日本三菱公司)；MCI HP20ss (63～150 μm)、HP20 大孔树脂 (日本三菱公司)；甲醇、乙腈(色谱级,美国TEDIA 试剂公司)。

赶山鞭于2015 年8 月采集于吉林省长春市,由中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物赶山鞭Hypericum attenuatumChoisy,现存放于湖北省武汉市中南民族大学药学院植物标本库(SC0863)。

2 提取与分离

取干燥的赶山鞭全草1 000 g,粉碎后加入80%乙醇浸提4 次(3 d/次) 合并4 次提取所得滤液,减压浓缩干燥即得浸膏112 g。待浸膏挥发至无乙醇味,加入热水将其以浸膏-水(1 ∶10) 在热水中充分分散,依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,减压浓缩得相应部位 分别为13、22、29 g。取21 g 乙酸乙酯部位经大孔树脂柱层析,以水-乙醇(10%～30%～50%～70%～80%～95%) 梯度洗脱,薄层色谱板检测,合并洗脱液得到8 个组分Fr.A～Fr.H。其中Fr.D 组分先用凝胶柱层析(甲醇加0.1%甲酸) 洗脱粗分,薄层色谱板检测合并得到8 个组分Fr.D1～Fr.D8,其中Fr.D6 经半制备HPLC 乙腈-水(12 ∶88～16 ∶84) 分离得化合物1 (32.1 mg)。Fr.D4 经半制备HPLC 乙腈-水(12 ∶88～16 ∶84) 分离得化合物2 (7.0 mg)、5 (90.4 mg)。Fr.D2 经半制备HPLC 乙 腈-水(10 ∶90～100 ∶0) 分离得化合物3 (20.3 mg)、4(85.7 mg)。Fr.E 中出现大量淡黄色的沉淀,过滤之后得化合物6 (1.2 g)。剩余的母液浓缩后用葡聚糖凝胶柱层析(甲醇加0.1%甲酸洗脱) 粗分为7 个组分,薄层色谱板检测合并得到7 个组分Fr.E1～Fr.E7。Fr.E2 经半制备HPLC 乙 腈-水(30 ∶70～100 ∶0) 分离得化合物7 (3.0 mg)。Fr.E3 经正相硅胶柱,薄层制备色谱及HPLC 乙腈-水(17 ∶83～23 ∶78) 得化合物8 (2.0 mg)、9(2.0 mg)。Fr.E4 经薄层制备色谱,HPLC 乙腈-水(10 ∶90～100 ∶0) 得化合物10 (100 mg)、11(6.8 mg)。Fr.E6 组分经HPLC 乙腈-水(10 ∶90～100 ∶0) 分离得化合物12 (3.0 mg)、14 (7.8 mg)、13 (13.0 mg)。Fr.H 用凝胶柱层析(甲醇加0.1%甲酸) 洗脱粗分,薄层色谱板检测合并得到16 个组分Fr.H1～Fr.H16,其中Fr.H1 中出现黄色粉末,过滤后重结晶得到化合物15 (0.6 g)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末,C7H6O3；ESI-MS:m/z139.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.88 (2H,d,J=8.7 Hz,H-2,6),6.81 (2H,d,J=8.7 Hz,H-3,5)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:170.2 (-COOH),163.4 (C-4),133.0 (C-2,6),122.8 (C-1),116.0 (C-3,5)。以上数据与文献［6］ 报道一致,故鉴定为对羟基苯甲酸。

化合物2:白色针晶,C16H20O9；ESI-MS:m/z355.2 ［M-H］-。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.59 (1H,d,J=15.9 Hz,H-7),7.25 (1H,d,J=1.3 Hz,H-2),7.18 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.15 (1H,dd,J=8.4,1.3 Hz,H-6),6.41 (1H,d,J=15.9 Hz,H-8),4.97 (1H,d,J=7.5 Hz,H-1′),3.90 (3H,s,-OCH3),3.88 (1H,dd,J=12.1,2.0 Hz,H-6′α),3.69 (1H,dd,J=12.1,5.4 Hz,H-6′β),3.40～3.54 (4H,m,H-2″-H-5″)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:171.4 (-COOH),151.0 (C-3),149.9 (C-4),145.5 (C-7),130.8 (C-1),123.3 (C-6),118.7 (C-8),117.3 (C-5),112.3 (C-2),102.2 (C-1′),78.3(C-5′),77.8 (C-3′),74.8 (C-2′),71.2 (C-4′),62.4 (C-6′),56.7 (-OCH3)。以上数据与文献［7］ 报道一致,故鉴定为反式阿魏酸-β-D-葡萄糖苷。

化合物3:淡黄色油状,C19H30O7；ESI-MS:m/z371.3 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:5.85 (1H,s,H-4),5.75 (1H,dd,J=15.4,6.5 Hz,H-8),5.61 (1H,dd,J=15.4,9.3 Hz,H-7),4.37 (1H,m,H-9),4.32 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.79 (1H,dd,J=11.8,2.3 Hz,H-6′α),3.63 (1H,dd,J=11.8,5.4 Hz,H-6′β),3.29(1H,m,H-4′),3.26 (1H,m,H-3′),3.18 (1H,ddd,J=9.4,5.5,2.4 Hz,H-5′),3.14 (1H,dd,J=8.9,7.9 Hz,H-2′),2.65 (1H,d,J=9.3 Hz,H-6),2.40 (1H,d,J=16.8 Hz,H-2α),2.01(1H,d,J=16.8 Hz,H-2β),1.90 (3H,d,J=1.1 Hz,H-13),1.26 (3H,d,J=6.4 Hz,H-10),1.00(3H,s,H-11),0.97 (3H,s,H-12)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:202.0 (C-3),165.9 (C-5),138.2 (C-8),128.8 (C-7),126.1 (C-4),102.4 (C-1′),78.0 (C-5′),77.9 (C-3′),77.0(C-9),75.2 (C-2′),71.64 (C-4′),62.6 (C-6′),56.7 (C-6),48.2 (C-2),37.1 (C-1),28.0 (C-13),27.6 (C-12),23.8 (C-11),21.0 (C-10)。以上数据与文献［8］ 报道一致,故鉴定为(6R,9R) -3-酮-α-紫罗兰醇-9-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4:淡黄色油状,C19H30O8；ESI-MS:m/z387.3 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:5.86 (3H,m,H-4,H-7,H-8),4.42 (1H,m,H-9),4.34 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.85 (1H,dd,J=12.0,2.0 Hz,H-6′α),3.62 (1H,dd,J=12.0,5.5 Hz,H-6′β),3.22～3.36 (3H,m,H-3′-H-5′),3.17 (1H,dd,J=9.2,7.9 Hz,H-2′),2.53 (1H,d,J=16.9 Hz,H-2α),2.15 (1H,d,J=16.9 Hz,H-2β),1.92 (3H,d,J=1.3 Hz,H-13),1.29 (3H,d,J=6.4 Hz,H-10),1.04 (3H,s,H-11),1.03 (3H,s,H-12)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:201.2 (C-3),167.3 (C-5),135.3 (C-8),131.5 (C-7),127.2 (C-4),102.7(C-1′),80.0 (C-6),78.1 (C-3′),78.0 (C-5′),77.3 (C-9),75.2 (C-2′),71.6 (C-4′),62.8 (C-6′),50.7 (C-2),42.4 (C-1),24.7 (C-12),23.4(C-11),21.2 (C-10),19.6 (C-13)。以上数据与文献［9］ 报道一致,故鉴定为(6S,9R) -6-羟基-3-酮-α-紫罗兰醇-9-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5:无色针晶,C8H8O；ESI-MS:m/z121.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.03 (2H,d,J=8.5 Hz,H-7,8),6.70 (2H,d,J=8.5 Hz,H-6,9),3.68 (2H,t,J=7.2 Hz,H-3),2.71 (2H,t,J=7.2 Hz,H-2)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:156.8 (C-5),131.0 (C-1),130.9 (C-7,8),116.1 (C-6,9),64.6 (C-3),39.4 (C-2)。以上数据与文献 ［10］ 报道一致,故鉴定为 2-oxabicyclo ［3.2.2］ nona-5,7,8-triene。

化合物6:黄色粉末,C21H20O12；ESI-MS:m/z463.2 ［M-H］-。1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ:12.54 (1H,s,H-5),7.57 (1H,dd,J=8.4,2.1 Hz,H-6′),7.43 (1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),6.71(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.31 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.10 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.28(1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),3.06～3.56 (6H,m,H-2″-H-6″)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:177.6 (C-4),164.3 (C-7),161.3 (C-5),156.4(C-9),156.3 (C-2),148.6 (C-4′),145.0 (C-3′),133.5 (C-3),122.1 (C-6′),121.2 (C-1′),116.0 (C-2′),115.3 (C-5′),104.0 (C-10),101.8 (C-1″),98.8 (C-6),93.6 (C-8),75.9 (C-5″),73.2 (C-3″),71.3 (C-2″),68.0 (C-4″),60.2 (C-6″)。以上数据与文献［11］ 报道一致,故鉴定为金丝桃苷。

化合物7:白色针晶,C19H30O8；ESI-MS:m/z430.6 ［M+HCOO］-。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.18 (1H,d,J=15.7 Hz,H-7),6.18 (1H,d,J=15.7 Hz,H-8),4.34 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.92 (1H,m,H-3),3.85 (1H,dd,J=12.0,2.0 Hz,H-6′α),3.66 (1H,dd,J=12.0,5.2 Hz,H-6′β),3.24～3.37 (3H,m,H-3′-H-5′),3.12(1H,dd,J=9.0,7.8 Hz,H-2′),2.41 (1H,ddd,J=14.6,4.9,1.2 Hz,H-4α),2.29 (3H,s,H-10),1.81 (1H,dd,J=14.6,8.4 Hz,H-4β),1.74 (1H,ddd,J=13.1,3.2,1.2 Hz,H-2α),1.41 (1H,dd,J=13.1,10.2 Hz,H-2β),1.21(3H,s,H-11),1.19 (3H,s,H-13),0.96 (3H,s,H-12)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:200.3(C-9),145.4 (C-7),133.8 (C-8),102.9 (C-1′),78.1 (C-3′),77.9 (C-5′),75.1 (C-2′),72.7 (C-3),71.6 (C-4′),71.1 (C-6),68.4 (C-5),62.7(C-6′),45.2 (C-2),38.2 (C-4),36.0 (C-1),29.5 (C-11),27.4 (C-10),25.5 (C-12),20.2(C-13)。以上数据与文献［12］ 报道一致,故鉴定为icaraside B2。

化合物8:黄绿色粉末,C26H34O11；ESI-MS:m/z521.3 ［M-H］-。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.00 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.86 (1H,dd,J=8.2,1.8 Hz,H-6),6.78 (1H,brs,H-6′),6.75 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.73 (1H,brs,H-2′),5.60 (1H,d,J=6.1 Hz,H-7),4.35 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),4.22 (1H,dd,J=9.7,5.6 Hz,H-9),3.86 (3H,s,3-OCH3),3.82 (3H,s,3′-OCH3),3.75 (1H,dd,J=9.6,8.1 Hz,H-9),3.65 (2H,m,H-8,9′α),3.56 (1H,t,J=6.4 Hz,H-9′β),3.20～3.56 (6H,m,H-2″-H-6″),2.62 (2H,t,J=7.5 Hz,H-7′),1.81 (2H,m,H-8′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:149.0 (C-3),147.5 (C-4),145.2 (C-4′),136.9 (C-5′),134.8 (C-1),129.6 (C-1′),119.7 (C-6),118.2(C-6′),116.0 (C-5),114.1 (C-2′),110.6 (C-2),104.6 (C-1″),89.0 (C-7),78.3 (C-3″),78.1(C-5″),75.2 (C-2″),72.5 (C-9),71.6 (C-4″),62.8 (C-6″),62.2 (C-9′),56.7 (3-OCH3),56.4(3′-OCH3),53.3 (C-8),35.9 (C-8′),32.9 (C-7′)。以上数据与文献［13］ 一致,故鉴定为二氢脱氢二松柏基醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9:淡黄色粉末,C26H36O12；ESI-MS:m/z539.4 ［M-H］-。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.02 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.97 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.88 (1H,d,J=1.9 Hz,H-2′),6.86 (1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′),6.75(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),6.73 (1H,dd,J=8.1,1.8 Hz,H-6),4.87 (1H,d,J=5.9 Hz,H-7),4.25 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),4.20 (1H,dd,J=9.8,5.4 Hz,H-8),3.92 (2H,m,H-9),3.86(3H,s,3′-OCH3),3.82 (3H,s,3-OCH3),3.52(2H,m,H-9′),3.20～3.75 (6H,m,H-2″-H-6″),2.68 (2H,m,H-7′),1.90 (2H,m,H-8′)；13CNMR (150 MHz,CD3OD)δ:151.7 (C-3′),148.8(C-3),147.6 (C-4),147.2 (C-4′),138.2 (C-1′),133.7 (C-1),122.1 (C-6′),120.7 (C-6),119.6 (C-5′),115.8 (C-5),114.0 (C-2′),111.6(C-2),104.5 (C-1″),87.7 (C-8),78.1 (C-5″),77.9 (C-3″),75.2 (C-2″),74.1 (C-7),71.6 (C-4″),69.9 (C-9′),62.8 (C-6″),61.8 (C-9),56.5(3′-OCH3),56.3 (3-OCH3),32.8 (C-7′),32.7(C-8′)。以上数据与文献［14］ 一致,故鉴定为4,7,9-三羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素-9′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物10:白色针晶,C8H8O4；ESI-MS:m/z169.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.55 (1H,dd,J=8.7,2.0 Hz,H-6),7.55 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.83 (1H,d,J=8.7 Hz,H-5),3.89 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:170.3 (-COOH),152.8 (C-3),148.8(C-4),125.4 (C-1),123.3 (C-6),116.0 (C-2),113.9 (C-5),56.5 (-OCH3)。以上数据与文献［15］ 报道一致,故鉴定为香草酸。

化合物11:白色针晶,C9H8O3；ESI-MS:m/z165.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.60 (2H,d,J=8.6 Hz,H-2,6),6.78 (1H,d,J=12.8 Hz,H-7),6.73 (2H,d,J=8.6 Hz,H-3,5),5.77 (1H,d,J=12.8 Hz,H-8)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:170.9 (C-9),159.8 (C-4),143.2 (C-7),133.3 (C-2,6),127.8 (C-1),117.8 (C-8),115.8 (C-3,5)。以上数据与文献［16］ 报道一致,故鉴定为顺式对羟基肉桂酸。

化合物12:黄色粉末,C21H20O12；ESI-MS:m/z465.3 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.71 (1H,d,J=2.2 Hz,H-2′),7.59 (1H,dd,J=8.4,2.2 Hz,H-6′),6.87 (1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.40 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.21 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.27 (1H,d,J=7.7 Hz,H-1″),3.20～3.85 (6H,m,H-2″-H-6″)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ:179.5 (C-4),166.1 (C-7),163.1 (C-5),159.0 (C-2),158.5 (C-9),149.9 (C-4′),146.0 (C-3′),135.6 (C-3),123.2(C-6′),123.1 (C-1′),117.5 (C-5′),116.0 (C-2′),105.7 (C-10),104.2 (C-1″),99.9 (C-6),94.7 (C-8),78.4 (C-5″),78.1 (C-3″),75.7 (C-2″),71.2 (C-4″),62.5 (C-6″)。以上数据与文献［17］ 报道一致,故鉴定为异槲皮苷。

化合物13:黄色粉末,C20H18O10；ESI-MS:m/z419.2 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ:13.06 (1H,s,H-5),7.53 (1H,dd,J=8.3,2.1 Hz,H-6′),7.43 (1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),6.87(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),6.68 (1H,s,H-3),6.17 (1H,s,H-6),4.75 (1H,d,J=7.0 Hz,H-1″),4.00 (1H,m,H-2″),3.86 (1H,m,H-5″α),3.74 (2H,m,H-3″,4″),3.61 (1H,m,H-5″β)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:182.0 (C-4),163.8 (C-2),163.0 (C-7),160.5 (C-9),153.9(C-5),149.9 (C-4′),145.8 (C-3′),121.6 (C-1′),119.2 (C-6′),115.8 (C-5′),113.9 (C-2′),103.7 (C-10),103.2 (C-8),102.5 (C-3),99.3(C-6),72.3 (C-3″),71.3 (C-1″),70.0 (C-2″),67.0 (C-5″),63.3 (C-4″)。以上数据与文献［18］报道一致,故鉴定为木犀草素8-C-α-L-阿拉伯糖苷。

化合物14:淡黄色粉末,C19H18O11；ESI-MS:m/z423.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,DMSOd6)δ:13.76 (1H,s,H-1),7.37 (1H,s,H-8),6.86 (1H,s,H-5),6.36 (1H,s,H-4),4.58(1H,d,J=9.8 Hz,H-1′),4.04 (1H,m,H-2′),3.68 (1H,d,J=11.3 Hz,H-6′α),3.10～3.45(4H,m,H-3′-H-5′,H-6′β)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ:179.1 (C-9),163.9 (C-3),161.9(C-1),156.3 (C-4a),154.2 (C-6),150.8 (C-10a),143.8 (C-7),111.7 (C-8a),108.0 (C-2),107.7 (C-8),102.7 (C-9a),101.3 (C-5),93.3(C-4),81.7 (C-5′),79.1 (C-3′),73.1 (C-1′),70.7 (C-4′),70.2 (C-2′),61.6 (C-6′)。以上数据与文献［19］ 报道一致,故鉴定为芒果苷。

化合物15:黄色粉末,C15H10O7；ESI-MS:m/z303.1 ［M+H］+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:7.73 (1H,d,J=2.2 Hz,H-2′),7.63 (1H,dd,J=8.5,2.2 Hz,H-6′),6.88 (1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.38 (1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.18 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:177.3 (C-4),165.6 (C-7),162.5 (C-5),158.2 (C-9),148.8 (C-2′),148.0 (C-2),146.2(C-3′),137.2 (C-3),124.1 (C-6′),121.6 (C-1′),116.2 (C-5′),116.0 (C-4′),104.5 (C-10),99.2 (C-6),94.4 (C-8)。以上数据与文献［20］报道一致,故鉴定为槲皮素。

4 讨论

本实验对采自吉林长春赶山鞭全草的乙酸乙酯部位进行分离鉴定得到15 个化合物,其中包括4个黄酮类、2 个酚酸类、2 个苯丙烯酸类、1 个氧杂蒽酮类,6 个其他类,其中11 个化合物为首次从该植物中分得。赶山鞭中含有黄酮类、挥发油、间苯三酚衍生物等成分［21］,黄酮类是赶山鞭植物的主要活性成分,其药理活性丰富。其中槲皮素是含量较高的一种黄酮醇类化合物,具有抗氧化、清除自由基、降血压、保护心肌缺血、增强免疫功能等作用［22］。异槲皮素为另一种黄酮类化合物,具有降血脂、抑菌、抗氧化等活性,并对肝损伤有保护作用,应用前景较好［23］。另含有黄酮苷类化合物金丝桃苷,它具有较强的镇痛和保护脑缺血损伤等多种药理活性作用,还能够抑制高糖诱导人静脉内皮细胞和小鼠血管炎症的发生,是治疗糖尿病和高血压的潜在有效治疗药物［24］。课题组前期对赶山鞭植物抗炎抗肿瘤作用进行研究,发现赶山鞭乙酸乙酯部位有显著的抗炎作用。鉴于其化学成分的复杂性及药理活性的多样性,有必要继续深入研究。同时在此基础上开发新的药用植物资源,发现更多结构新颖的化合物,需要进一步明确其在体内的作用机制,以期为其药效基础研究以及金丝桃属植物活性提供参考。