吴丽媛，张守明

（安阳市畜产品质量安全监测检验中心，河南 安阳 455000）

丁酸梭菌是一种革兰氏阳性厌氧梭状内生芽孢杆菌，一般存在于土壤、健康动物粪便中，因能够产生以丁酸为主要成分的有机酸而命名为丁酸梭菌。最早在1880年由Prazmowski 从猪的肠道中分离出来，1996年，我国筛选出第一株用于治疗大肠杆菌、沙门氏菌等引起的肠炎、腹泻的CGMCC313-1 菌株。丁酸梭菌制剂随后在动物养殖生产中开始迅速开发研究、推广应用。

1 丁酸梭菌的创制技术工艺

丁酸梭菌制剂的制备方法较多，有不少优化生产工艺，比如在菌种制备、接种量、发酵培养基和添加物等环节以及创制环境温度、发酵罐转速和压力等要求上有所差别，但是，丁酸梭菌及其菌制剂的生产工艺大体包括菌种的活化及种子液的制备、液体发酵、发酵液干燥。

1.1 菌种的活化

首先制作活化液。取GAM 培养基50.0g，加热溶解1000mL 蒸馏水中，120℃高压灭菌10min，冷却至室温，再加入脱纤维兔血60mL，氯化血红素1.5g，卡那霉素80mg，万古霉素1mg，新霉素80mg，混匀，得到活化液。其次，在厌氧条件下，培养菌种。从保存有丁酸梭菌菌种的保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，37℃下培养24～36h。

1.2 一级种子培养液

将纯种活化制备好的丁酸梭菌活化液厌氧环境下接种到发酵罐内的发酵培养基中，一般接种量为2%～7%，在发酵温度37℃和罐压为0.1～0.5Mpa 下进行一级种子液的培养。这期间发酵罐平均转速为500r/min，速度过高，不利于种子液的生成培养。值得注意的是培养全程要通入氮气，对环境酸度也有严格要求，一般控制培养环境pH 值为4.0～5.0，发酵培养时间不超过10h，作为一级种子培养液。……