申 利，刘 佳，林星光

(华中科技大学同济医学院a.附属梨园医院妇产科，武汉 430077； b.附属同济医院妇产科，武汉 430030)

子宫内膜癌是常见的妇科肿瘤，位居世界肿瘤的第6位，近年来其发病率逐年增加，对女性生命健康已构成严重威胁[1-2]。微小RNAs(miRNAs)可通过与靶基因mRNA 3′UTR区不完全互补调控靶基因的表达，进而调控癌细胞的恶性生物学行为，参与子宫内膜癌进程[3-4]。miR-497-5p是miR-15家族成员，被证实在胃癌、卵巢癌和结直肠癌等多种肿瘤组织中低表达，被认为是一种重要的抑癌因子[5-7]。近年有研究[8]发现，在子宫内膜癌组织中miR-497-5p异常低表达，且其表达水平与临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关，但miR-497-5p在子宫内膜癌细胞转移中的作用未见报道。本研究以子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究对象，探讨miR-497-5p对Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)的影响，旨在初步了解miR-497-5p在子宫内膜癌发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

RPMI-1640培养基、胰蛋白酶和LipofectaminTM2000购于美国Invitrogen公司，胎牛血清购于美国Hyclone公司，基质胶购于美国BD公司，Transwell小室购于美国Corning公司，聚偏氟乙烯(poly vinylidene fluorid，PVDF)膜购于美国Hybond公司，青-链霉素购于美国Sigma公司。RIPA裂解液、结晶紫和多聚甲醇购于中国碧云天，N-cadherin、Vimentin和E-cadherin单抗体购于英国Abcam公司，货号：6781-50、6771-100、AF0131，VEGFA、GAPDH单抗体购于美国Santa Cruz公司，货号：MAB0294、10494-1-AP。辣根酶标记山羊抗鼠/兔IgG多抗购于北京中杉金桥公司，货号：ZB-2301。miR-497-5p mimic、miR-497-5p inhibitor及阴性对照、VEGFA慢病毒表达载体pLV-VEGFA质粒、VEGFA 3′-UTR的野生型(VEGFA-WT)与突变型(VEGFA-MUT)双荧光素酶质粒均是由上海吉玛制药公司设计合成。Trizol Reagent、Real time PCR试剂和总RNA提取试剂盒购于日本TaKaRa公司，反转录试剂盒购于美国Applied Biosystems公司，双荧光素酶检测试剂盒购于美国Promega公司。……