乔予希，丁小明，王 颖，丁晨光，郑 瑾，项和立，薛武军，李 杨

（西安交通大学第一附属医院肾移植科，陕西 西安 710061）

2 型糖尿病是我国常见的内分泌代谢性疾病，以胰岛素抵抗及胰岛素分泌相对不足为基本特征。随着2 型糖尿病病程的延长，患者会出现胰岛β 细胞数目减少，引起胰岛功能减退［1］。胰岛β 细胞数目的减少与细胞凋亡激活、细胞周期停滞等引起的细胞损伤密切相关，多项关于胰岛β 细胞损伤的研究认为，持续存在的高糖环境能够引起胰岛β 细胞凋亡及细胞周期停滞［2-4］，但具体的分子机制仍不十分明确。

P27 是靶向调节细胞凋亡及细胞周期的分子，能够靶向抑制细胞周期蛋白D1（cyclinD1）与激酶的结合并引起细胞周期停滞，也能激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8（cysteinyl aspartate specif⁃ic proteinase-8，caspase-8）并促进细胞凋亡。多项糖尿病相关的研究表明，高糖能够使神经、肾脏等组织中P27 表达增加并引起神经及肾脏损害［5，6］；也有胰岛β 细胞相关的研究表明，P27 参与细胞凋亡及细胞周期的调控［7］。但P27 在高糖引起胰岛β 细胞损伤中的作用尚不明确。为此，本实验将以胰岛INS-1 细胞为对象，具体分析高糖通过P27 途径诱导胰岛β 细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 细胞

胰岛INS-1 细胞购自ATCC 公司。

1.2 试剂

P27 siRNA 及阴性对照（negative control，NC）siRNA 购自上海吉玛公司，转染试剂Lipo⁃fectamine2000 购 自Invitrogen 公 司，MTS 细 胞 活 力检测试剂盒购自MTS 公司，TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天公司，RIPA 裂解液、BCA 蛋白定量试剂盒购自北京索莱宝公司，P27、caspase-3、cyclinD1 的一抗购自Abcam 公司。

1.3 仪器

细胞培养箱购自Thermo 公司，显微镜购自Nikon 公司，流式细胞仪购自BD 公司，酶标仪、凝胶成像仪购自Bio-rad 公司。……