人狂犬病病毒抗体ELISA 定量检测方法的建立
2021-03-20卞论赵卉贾庆钊方浩霖何春辉叶珂林冠峰吴英松
卞论,赵卉,贾庆钊,方浩霖,何春辉,叶珂,林冠峰,吴英松
1.南方医科大学,广东 广州510515;2.中山大学附属第三医院,广东 广州510000;3.广州诺诚生物制品有限公司,广东广州511495
狂犬病是病死率极高的急性传染病,目前尚无有效的治疗手段,疫苗免疫是预防该病发生的唯一途径[1-2]。狂犬病血清学检测用于常规狂犬病疫苗免疫后的效果评价。检测狂犬病病毒中和抗体可评价人用狂犬病疫苗的免疫学效果、狂犬病免疫球蛋白的中和活性、进行狂犬病病例实验室诊断等[3]。世界卫生组织推荐的狂犬病病毒中和抗体检测标准方法为小鼠脑内中和法(mice neutralization test,MNT)和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)[4]。两者均存在耗时长、设备成本高等缺点,不方便大规模普及[5]。ELISA 法可作为MNT、RFFIT 的潜在替代性检测方法,因其敏感、简单、重复性好等优点[6],可使人体抗狂犬病病毒抗体水平的检测更方便和快捷[7]。
本研究建立了检测狂犬病病毒抗体的ELISA定量检测方法,并验证了其临床应用的性能及可行性。
1 材料与方法
1.1 病毒及血清 PM 株狂犬病病毒灭活全病毒及血清样本由广州诺诚生物制品有限公司提供;人抗狂犬病病毒血清国家标准品购自中国食品药品检定研究院。
1.2 主要试剂及仪器 抗狂犬病病毒单克隆抗体(S010,线性表位)由南方医科大学抗体工程研究所保存;抗人IgG 二抗(抗人IgG-6#)购自深圳菲鹏生物股份有限公司;盐酸阿霉素、BSA、EDC、NHS、丙烯酰胺、SDS、TMB 为美国Sigma 公司产品,其他试剂均为国产分析纯;HRP 快速标记试剂盒购自北京博奥龙免疫技术有限公司;……
