孟虹，赵怡，李宪臻，李蓉

大连工业大学生物工程学院，辽宁大连116000

异麦芽酮糖（α-D-glucosylpyranosyl-1，6-D-fructofranose）是蔗糖的一种同分异构体，其物理性质与蔗糖相似，由于其能以缓慢的速率将葡萄糖释放于血液中，避免人体血糖突然上升及下降，对人体机制具有保护作用，因此被广泛应用于食品工业，是目前较受欢迎的甜味剂［1］。蔗糖异构酶是一种高效的将蔗糖转换成异麦芽酮糖的生物酶试剂，其高效专一，转化效率高，但利用游离的蔗糖异构酶作用时，其易失活、不稳定、难以重复利用及效率低［2-3］。因此，一般选用将蔗糖异构酶进行固定化来解决这一问题。酶的固定化方法较多，主要有物理及化学法［4-5］，传统的固定化方法虽可提高酶的稳定性，但往往会导致酶活性的降低。

近年来，酶的固定化载体材料已逐渐由高分子材料转向纳米材料［6-7］，因纳米材料拥有较大的表面积及巨大的空间结构，增加了酶的装载量，利于酶与底物充分接触反应，从而提高了游离酶的稳定性［8］，却不对游离酶的活性造成损失［9-10］。目前，纳米花型固定化方法受到广泛关注［11］。有文献表明，利用含Cu2+的无机物与蛋白质杂化形成的纳米花，可提高游离酶的稳定性及效率［12］。

本实验以蔗糖异构酶PalⅠ结合Cu2+制备纳米花固定化酶（简称蔗糖异构酶PalⅠ-Cu2+纳米花），优化制备条件，通过扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）及透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）观察纳米花固定化酶的形态结构，并分析其稳定性及重复利用性。

1 材料与方法

1.1 菌株 重组表达菌株pET28a-PalⅠE.coliBL21（DE3）［其中……