贾钦瑞，鲍子磊，车传忠，郑学功，翟少华，冉多良

新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052

马疱疹病毒1 型（equine herpesvirus-1，EHV-1）是马属动物传染性疾病重要病原之一，该病在全世界广泛分布，患病马主要临床症状为呼吸系统疾病、孕马流产、新生马驹死亡和中枢神经系统（CNS）疾病，给养马业造成严重的经济损失［1-4］。

目前该病防治措施主要以疫苗免疫为主，获得高纯度、高回收率、稳定性较好的病毒能减轻免疫后副反应，是提高疫苗质量及安全的重要手段［5］。国内还未研制EHV-1 商品化疫苗，纯化工艺尚需补充。本研究采用蔗糖密度梯度超速离心法纯化EHV-1病毒颗粒，通过免疫电镜观察、病毒效价、SDS-PAGE、Western blot、马致病性试验方法，对纯化方法的可行性进行分析，以期用于抗体制备、筛选及抗原检测等相关研究，为该病毒的疫苗研发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 病毒及细胞 EHV-1-XJ2015 分离株、RK-13 细胞由新疆农业大学传染病实验室保存。

1.2 主要试剂及仪器 EHV-1 标准阳性血清由美国俄亥俄州动物疫病诊断实验室（ALADS）惠赠；高糖培养基（DMEM）、双抗购自美国Hyclone 公司；胎牛血清购自以色列BI 公司；胰酶、EDTA 购自北京索莱宝科技有限公司；硫酸铵、蔗糖、透析膜购自生工生物工程（上海）股份有限公司；BCA 蛋白定量分析试剂盒购自美国Thermo 公司；HRP 标记的山羊抗马IgG 购自美国Abcam 公司；PVDF 膜购自美国Millipore 公司。

1.3 实验动物 母马，2～3 岁，购自伊犁尼勒克马场，通过间接ELISA 方法［6］筛选EHV-1 抗体阴性马匹。

1.4 细胞培养及病毒增殖 RK-13 细胞长成致密单层时更换为含1% FBS 的DMEM 培养基，将EHV-1-XJ2015 按MOI = 0.1 接种细胞，37 ℃，5% CO2培养箱培养至CPE 达90%以上时，收获病毒液。……