周云，方超，王丽，祁碧玉，金香玉，杨世龙，谭小东

安徽智飞龙科马生物制药有限公司，安徽合肥230088

流感病毒引起的流行性感冒是人类每年面临的全球性危害之一，控制流感暴发和传播主要依靠接种疫苗。已上市的流感疫苗无法产生广谱抗体，病毒血凝素（hemagglutinin，HA）会快速漂变。WHO PPC（WHO Preferred Product Characteristics）于2017 年对下一代流感疫苗开发提出了新的目标：2027 年的流感疫苗针对甲型流感的持续保护至少达5 年［1］。因此，新型流感疫苗的开发和研制迫在眉睫。

目前，新型流感疫苗的抗原设计主要考虑蛋白保守序列，常用的靶点包括：HA 头部和茎部结构域、M2 蛋白胞外离子通道（extracellular ion channel of M2 protein，M2e）、核蛋白（nucleoprotein，NP）和基质蛋白M1［2］。流感融合蛋白候选疫苗M-001 由HA、M1、NP的9 个抗原表位组成，一项Ⅰ期临床研究的结果显示，其可激发CD4+和CD8+淋巴细胞活性，促进IL-2和干扰素γ 的分泌［3］；使用初免-加强策略的Ⅱ期临床研究中，用M-001 初免可显著增强季节性流感疫苗（TIV）和H5N1 型流感疫苗的血凝抑制反应［4-5］。类似的候选疫苗Flu-V 由M1、M2、NP 和PB1 相关的6 个保守抗原表位融合而成，含佐剂Montanide ISA-51，能够诱导产生HLA-A*0201 介导的CD8+T 细胞免疫反应，保护小鼠免于致死剂量A／Puerto Rico／8 ／34 毒株攻毒而死亡［6］。

本研究采用人流感病毒HA、NP、基质蛋白M1抗原表位融合蛋白（FP），分别辅以氢氧化铝、聚肌胞（PolyIC）+ 氢氧化铝和阳离子佐剂免疫小鼠，通过检测甲、乙型流感病毒血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）抗体和HA IgG 抗体水平，比较其在小鼠体内对季节性流感疫苗毒株免疫原性的影响。

1 材料与方法

1.1 抗原及佐剂 抗原FP 为9 个抗原表位连接后重复5 次融合而成，参照文献［3］设计并优化后用于CHO 细胞表达，基因序列委托南京金斯瑞生物科技有限公司合成，交付产品为重组pUC57 质粒；……