李兴航，刘琛，张家友，闫璐瑶，韩天，刘博，李芳，宋颖丽，杨晓明

1.武汉生物制品研究所有限责任公司，湖北 武汉430207；2.国家联合疫苗工程技术研究中心，湖北 武汉430207；3.中国生物技术股份有限公司，北京100029

流行性感冒病毒（以下简称流感病毒）是引起人类和哺乳动物流行性感冒的病原体，根据其核蛋白（nucleo protein，NP）和基质蛋白1（matrix protein 1，M1）的特性分为甲、乙、丙型［1］，最近还发现了丁型［2］。其中甲型流感病毒可依据血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）分为不同的亚型，乙型流感病毒一般被分为Victoria 和Yamagata 2 个谱系［3］。每年由甲、乙型流感病毒引起的流感严重危害人民群众健康，对社会经济造成巨大的损失［4］。

接种流感疫苗是全球防范流感最有效的策略［5］。目前，流感疫苗的生产主要依靠鸡胚进行病毒增殖，该生产模式具有成本低，工艺成熟等优势，但其病毒疫苗株可能出现适应性突变，难于进行监控，且受制于鸡胚供应等问题［6］。采用细胞基质进行流感疫苗生产不仅对生物反应器大规模生产有利，病毒疫苗株也不会出现适应性突变。有研究表明，采用MDCK 细胞为基质生产的流感疫苗与鸡胚基质流感疫苗相比，免疫原性和保护效果均更好［7-8］。本研究主要对四价流感疫苗所包含的4 种亚型疫苗株在MDCK 细胞上的增殖条件进行优化，以期为采用MDCK 细胞为基质四价流感疫苗的大规模生产奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞株及疫苗株 MDCK（ATCC-CCL-34）细胞购自ATCC，由武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室保存及传代，采用65 ～ 75 代细胞进行后续试验；……