(1 青岛大学附属医院麻醉科，山东 青岛 266003; 2 青岛大学附属青岛妇女儿童医院麻醉科)

吗啡在缓解中重度疼痛中占有重要地位，但长期应用可导致患者吗啡耐受和(或)痛觉过敏，影响了其在临床上的应用[1-2]。近年来研究发现，小胶质细胞作为中枢神经系统的巨噬细胞，其不同的活化状态(M1/M2型)在吗啡耐受和痛觉过敏中发挥着重要作用[3-6]。吗啡能够导致小胶质细胞激活，使白细胞介素1(IL-1)等炎症因子产生增多，进而产生吗啡耐受，小胶质细胞活化为M1型时可使IL-1β等促炎因子表达明显增多[7]。当小胶质细胞活化为M2型时，细胞中的抗炎细胞因子脑源性神经营养因子(BDNF)等表达增多[6]，BDNF能与酪氨酸激酶B(TrkB)受体结合使增强神经元兴奋性增高进而导致患者痛觉过敏[8]。但关于小胶质细胞极化状态在吗啡耐受和痛觉过敏中的具体作用机制尚不清楚。本研究拟通过不同浓度吗啡对小胶质细胞极化状态影响的研究，探讨吗啡耐受和痛觉过敏的产生及调节机制,以便指导临床实践。

1 材料与方法

1.1 材料来源

大鼠小胶质细胞HAPI株购自赛齐(上海)生物工程有限公司。

1.2 药品与试剂

Arg-1、iNOS、CD86、CD206和β-actin兔抗大鼠一抗购自美国Abcam公司；羊抗兔二抗购自中国Elabscience公司；胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司；L-多聚赖氨酸、青霉素与链霉素混合液、2.5 g/L胰蛋白酶液以及PBS磷酸盐缓冲液均购自北京索莱宝公司。

1.3 小胶质细胞的培养

大鼠小胶质细胞HAPI株复苏后，置于含10×104U/L青霉素与0.1 g/L 链霉素的DMEM培养基中，于37 ℃、含体积分数0.05 CO2的恒温箱中进行培养，待细胞融合度约达70%时，胰蛋白酶消化并吹打成单细胞悬液，按照1∶3传代。……