谭 芳， 胡 娟， 李 擎， 杨晓燕， 雷小勇

(南华大学湖南省分子靶标新药研究协同创新中心 南华大学药物药理研究所，湖南省衡阳市421001)

RASAL2蛋白是由RASAL2基因编码的一种RAS-GTP酶活性蛋白(RAS GTPase activating protein， RASGAP)[1]。RASGAP主要负责促进RAS基因RASGTP酶的活性，既往研究发现人类20%～30%的肿瘤发生是由于RAS突变而导致的三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)水解发生障碍[2-4]。 而RASAL2作为RAS基因的一个重要的活性蛋白，主要作为一个抑癌因子参与肿瘤进展。然而，调控RASAL2表达的具体机制尚不清楚。

微小核糖核酸(microRNA, miRNA)作为一类单链非编码RNA，长度约为22个核苷酸，具有高度保守性。研究发现，miRNA主要通过与靶基因mRNA的3′-非翻译区(3′-untranslated region，3′-UTR)碱基互补配对，来阻碍靶基因mRNA翻译成蛋白质或导致其降解，这属于在转录后水平的一种调控基因表达的方式[5-8]。大量研究表明，miRNA 在肿瘤细胞增殖、凋亡、转移、耐药等各种生理病理过程中发挥关键作用[9-11]。本课题组通过在线数据库Targetscan发现，RASAL2 3′-UTR可能存在与miR-1290互补配对的结合序列。miR-1290在肿瘤细胞中表达异常，参与了多种恶性肿瘤的发生发展。研究发现，miR-1290能够与hMSH2、FOXA1、NFIX等多种基因3′-UTR区结合进而调控相关基因的表达[12-14]。然而，miR-1290与RASAL2之间是否存在靶向调控机制还不清楚。因此，本研究以miR-1290为研究对象，采用双荧光素酶报告基因系统来证实其与RASAL2基因的靶向关系，希望能为miR-1290在肿瘤中调控机制的研究工作奠定基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料

人肾上皮细胞293T购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；引物合成委托上海捷瑞生物工程有限公司完成；TOP10感受态细胞、GV272载体及miR-1290质粒均购于上海吉凯基因。……