防污染PCR检测食源性沙门菌方法的建立
2021-03-16黄名英傅安静王远微
黄名英 , 傅安静 , 王远微
(1. 成都农业科技职业学院 , 四川 成都 611130 ; 2. 西南民族大学畜牧兽医学院, 四川 成都 610041)
沙门菌(Salmonella)是一种可导致人兽共患病的肠道菌科细菌,为两端钝圆的革兰阴性菌,兼性厌氧[1],无芽孢,一般无荚膜,除鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌外,其他都有周身鞭毛。在世界食源性病原菌引起的食物中毒事件中,沙门菌经常位列榜首[2]。沙门菌在自然界中广泛存在,种类繁多,目前已检测出的沙门菌血清型有2 500余种,我国已报道的有292种血清型[3]。沙门菌营养要求低,繁殖快,在常温条件下即可繁殖,以肉类食品为主要污染对象,也可污染禽类、蛋类等食品[4-5]。传统方法检测沙门菌时间长,工作量大,特异性和灵敏度也不高[6],因此,如何快速准确检测出沙门菌对于食物中毒的防控极为重要。随着分子生物学技术的发展,沙门菌的检测方法也出现了聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)法[7-8]、实时荧光PCR法[9]、环介导等温扩增法(LAMP)[10]等。
PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,具有特异性强、灵敏度高、简便快速等特点,被广泛应用于食品检测中。但PCR技术过高的灵敏度导致其极易污染,产生假阳性结果,严重干扰PCR检测的准确性。而且随着技术不断发展,实时荧光PCR法和环介导等温扩增法等检测方法的灵敏度越来越高,造成污染的风险也越来越高。造成PCR污染的主要污染源是扩增产物和阳性对照物。由于拷贝数量极大,在PCR扩增时的开盖、摇动、吸样过程中与空气接触形成气溶胶体,对空气、试剂、移液器以及操作人员的手套衣物造成污染[11],反复造成阴性对照出现假阳性,导致检测无法正常顺利进行。……
