王若宇，伍玉南，唐 丹

细胞核增殖抗原Ki67是反映细胞增殖的核抗原，是目前应用最广泛的增殖细胞标记之一。临床上，检测肿瘤组织Ki67可反映肿瘤细胞增殖水平，预测肿瘤患者预后[1,2]。微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码RNA，在细胞增殖、分化和凋亡过程中发挥重要作用，在肿瘤组织和正常组织其水平存在差异[3]。研究表明，非小细胞肺癌患者癌组织miRNA-26b水平与癌旁组织或良性病变的正常组织相比均显著下调，以此诊断非小细胞肺癌的敏感性和特异性分别为79.9%和79.4%。miRNA-26b表达是非小细胞肺癌预后不良的危险因素[4]。本研究采用RT-qPCR法检测了HCC患者血浆Ki67和miRNA-26b水平，分析了不同临床和病理学特征患者这两种指标的差异，或为临床诊断HCC患者提供新手段。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2016年12月～2018年12月我院诊治的HCC患者90例，男57例，女33例；年龄28～71岁，平均年龄为(50.1±11.7)岁。诊断符合《原发性肝癌规范化诊断指南(2015年版)》[5]。另选择乙型肝炎肝硬化患者60例，男36例，女24例；年龄25～74岁，平均年龄为(48.2±12.0)岁，诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》的标准[6]。排除标准：1)入院时肝功能存在严重障碍；2)合并其他恶性肿瘤；3)接受放化疗及其他辅助治疗。本研究通过了我院医学伦理委员会的批准，患者签署了知情同意书。

1.2 主要试剂 TRIzol Reagent、miRNA-26b、U6引物(均购自美国Invitrogen公司)，Ki67和β-actin上下游引物(北京六合华大基因科技股份有限公司)，SYBR Green PCR Master Mix(TaKaRa)，RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo Scientific)，无核酸酶水(DEPC处理水，Sigma)。

1.3 血浆miRNA-26b和Ki67水平检测 抽取外周静脉血6 mL，置于EDTA抗凝管，1 h内在4℃条件下用低速离心机2500 r/m离心10 min。取血浆600μL，分装于2 mL无RNA酶的EP管中，置于-80℃冻存。……