吴 磊，刘瑞莉，柏学进，刘贤勋，吕娟娟，肖超柱，董雅娟,3*

（1.青岛农业大学动物胚胎工程中心，山东青岛 266109；2.山东省黑牛繁育工程技术研究中心，山东青岛 266109；3.山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司，山东淄博 256306）

CREB调节转录共激活因子家族（CREB Regulated Transcription Coactivator Family，CRTCs）是由基因组高通量筛选出的一种保守的真核蛋白家族，包含CRTC1、CRTC2、CRTC3 3 个成员。CRTCs家族的卷曲螺旋结构域（Coiled-coil Domain）高度保守，与CREB的碱性亮氨酸拉链结构域（Basic Leucine Zipper，bZIP）相结合，调控CREB的转录[1]。CRTC1在大脑中主要通过调控脑源性神经营养因子（Brain-derived Neurophic Factor，BDNF）来调节树突的生长发育和糖代谢过程[2-3]，此外，β-淀粉样蛋白（Amyloid β-protein，Aβ）可能通过影响CRTC1的活性来干扰与记忆相关的基因转录，从而在神经退行性疾病阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）的发病过程中发挥重要作用[4-5]。CRTC3基因广泛分布于各组织细胞中，在棕色脂肪中CRTC3 蛋白通过儿茶酚胺信号通路影响脂肪代谢。可见，CREB调节转录共激活因子家族参与多种生理调控，对机体生长发育具有重要作用。

本研究以布莱凯特黑牛为研究对象，通过克隆测序检测其CRTC1、CRTC3基因的CDS 序列，并进行生物信息学分析；运用荧光定量检测CRTC1、CRTC3基因mRNA 相对表达量；并用免疫组化技术检测CRTC1、CRTC3 蛋白的表达位点，探讨CRTC1、CRTC3基因与肉牛肌肉生长发育的关系，以期为布莱凯特黑牛品种繁育提供基因储备，并为进一步研究CRTC1、CRTC3基因的功能提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验试剂及仪器 氨苄、IPTG、X-Gal 购自大连宝生物工程有限公司；琼脂糖凝胶回收试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；T 载体连接试剂盒购自上海生工生物股份有限公司；……