汪 洋，王一娜，徐克明，冉安鹏，何 丹

（新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科，乌鲁木齐830011）

在世界范围内，肺癌的发病率及死亡率较高[1]，在我国，肺癌的发病率也有逐年上升趋势[2]。多数早期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者无任何症状，因此导致许多NSCLC患者在确诊时已非早期，需要术后辅助化疗[3]。已有学者发现，某些生物分子标志物对指导肿瘤患者个体化治疗有着至关重要的作用[4-5]，核苷酸切除修复交叉互补组1（excision repair cross complementing group 1，ERCC1）的表达可以作为铂类化疗敏感性的预测指标，影响患者预后[6-7]。此外p38信号通路被认为与肿瘤耐药密切相关。已有研究发现在人肺癌细胞中，p38信号通路能够诱导的MDM2降解进而导致紫杉醇耐药[8]。本研究拟以人肺癌细胞H1975为研究对象，探索p38信号通路与ERCC1之间是否存在调控关系，并通过免疫组化染色分析非小细胞肺癌肿瘤组织中磷酸化p38（phosphorylated p38，pp38）和ERCC1的相关性及对预后的影响，为临床NSCLC患者个体化治疗方案的选择提供依据。

1 材料和方法

1.1 试剂和抗体ERCC1购自Abcam公司。p38抑制剂BIRB796购自Selleckchem。pp38和p38抗体购自CST公司。人肺腺癌细胞H1975购自中国医学科学院上海细胞库。使用RPMI-1640培养液于37℃，5%CO2环境下常规培养，血清浓度为10%，青霉素浓度为100 U/mL，链霉素为0.1 mg/mL。紫杉醇及其他试剂购自Sigma Chemical公司。

1.2 CCK8增殖实验取对数生长期H1975细胞，用RPMI1640完全培养基制备成5×104个/mL单细胞悬液，分别接种至两个96孔板中。24 h后弃去旧培养基，分别加入不同药物处理组（紫杉醇与BIRB796抑制剂合用组需先加入BIRB796处理1 h后再加入紫杉醇)，设置空白对照与试剂背景孔，置于37℃培养12 h与24 h，吸干细胞培养基后加入10%CCK-8溶液，37℃孵育，1-2 h内酶标仪450 nm波长检测OD值。……