刘国军 卢梓平 赖茂 黄小盼 万晶晶 刘蔡伟

支气管哮喘(bronchial asthma)是儿童常见的气道炎症性疾患。哮喘可降低儿童生活和学习，严重者可影响儿童生长发育。研究显示气道炎症及气道高反应性是哮喘本质，Th1、Th2 免疫细胞失衡和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-17 等炎症因子均参与哮喘发病机制［1］。基于此而进行的糖皮质激素抗炎治疗取得了很大的成效，但是哮喘发病仍未有效控制，激素治疗带来儿童生长发育的潜在影响也一直困扰医生和家长。树突状细胞(dendritic cells，DC)是重要的抗原呈递细胞，亦是重要的免疫调节应答细胞，能刺激初始型T 淋巴细胞增殖，体内最重要的抗原呈递和它在指导Th0 分化为Th1 和Th2 效应细胞，以及Treg 调节细胞中发挥重要的作用［2，3］。研究其与过敏反应的关系，有助于进一步理解哮喘的发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取东莞市儿童医院2018 年7 月～2019 年12 月在儿童呼吸科就诊的38 例支气管哮喘患儿作为哮喘组,所有患儿全部符合《诸福棠实用儿科学》第8 版［4］及《中国儿童支气管哮喘诊断与防治指南(2016 年版)》［5］关于支气管哮喘的诊断及治疗标准。将哮喘组患儿随机分为控制组(21 例)及新诊断组(17 例),控制组男8 例,女13 例,平均年龄(11.6±2.9)岁；新诊断组男6 例,女11 例,平均年龄(11.9±2.3)岁。选取17 例同期本院保健科体检健康儿童作为对照组,男9 例,女8 例,平均年龄(11.1±3.6)岁。三组一般资料比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。所有患儿均无自身免疫性疾病,近3 个月内无呼吸道感染的病史。控制组经正规抗哮喘治疗(吸入布地柰德雾化溶液0.5 mg,b.i.d.)3 个月及以上,控制肺功能及呼出气一氧化氮(FeNO)至正常范围［5］。

1.2 方法 从外周血先获得外周血单核细胞,通过诱导分化得到成熟DC 细胞,再进行流式分选。利用流式细胞技术［流式细胞仪(美国BD 公司(Becton,Dickinson and Company)］分选cDC 和pDC 细胞,比较不同亚型的DC 数量和百分含量；采用q-PCR 技术检测细胞因子IL-12 的表达水平,分析是否有显著性差异,并测定外周血EOS%、IgE。

1.3 观察指标 分析比较三组外周血cDC 数量、DC功能指标(IL-12、EOS%、IgE)。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组外周血DC 数量比较 新诊断组pDC 数量(14.19±6.89)×106/L 高于控制组的(9.70±4.90)×106/L和对照组的(8.52±4.18)×106/L,差异均具有统计学意义(P＜0.05)；控制组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。见图1。新诊断组cDC 数量(3.85±1.32)×106/L与控制组的(4.16±1.51)×106/L 和对照组的(3.67±1.85)×106/L 比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。见图2。

图1 三组外周血pDC 数量

图2 三组外周血cDC 数量

2.2 三组DC 功能指标比较 新诊断组的IL-12(28.65±10.20)pg/ml 低于控制组的(31.23±7.93)pg/ml 和对照组的(41.68±11.53)pg/ml，EOS%(12.3±4.6)%、IgE(863±56)IU/ml 高于控制组的(8.5±3.2)%、(231±38)IU/ml 和对照组的(2.3±1.2)%、(32±16)IU/ml，且控制组的IL-12 水平低于对照租，EOS%、IgE 水平均高于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 三组DC 功能指标比较()

表1 三组DC 功能指标比较()

注：与对照组比较,aP＜0.05；与控制组比较,bP＜0.05

3 讨论

支气管哮喘是儿童时期最常见的慢性气道炎症性疾病。近几十年来我国儿童支气管哮喘的流行病学调查显示，儿童支气管哮喘患病率呈逐年上升趋势。1990 年全国城市14 岁以下儿童支气管哮喘的累积患病率为1.09%，2000 年为1.97%，2010 年为3.02%［6-8］。现有资料显示，支气管哮喘是由多种细胞(如EOS、肥大细胞、T 淋巴细胞、中性粒细胞及气道上皮细胞)和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病［4］，虽然基于此而进行的糖皮质激素抗炎治疗取得了很大的成效，但支气管哮喘的控制情况仍不理想［9］，而且激素治疗带来儿童生长发育的潜在影响也一直困扰医生和家长［10，11］。因此，深入探索支气管哮喘发病机制、寻找诊断和治疗方法一直是呼吸系统疾病研究领域的重要课题。

T淋巴细胞系统激活引起特异性细胞免疫及体液免疫反应，通过分泌细胞因子产生炎症反应，促进气道慢性炎症的产生及进展［12，13］。抗原的递呈是T淋巴细胞激活最重要的起始因素，DC 是最重要的抗原呈递细胞。它在指导Th0 分化为Th1 和Th2 效应细胞，以及Treg 调节细胞中发挥重要的作用。研究其与过敏反应的关系有助于进一步理解哮喘的发病机制［14］。研究表明，人体内粒细胞，单核细胞进行分化和增殖并能产生集落，该细胞因子尤其促进DC 前体细胞的分化，由此只产生三种主要的DCs，包括CD1c+DCs、CD141+DCs以及pDCs。cDCs 诱导Th1 细胞，在受到刺激时分泌IL-12、TNF-α、IL-8 和IL-10。而pDCs 诱导Th2 细胞的发育，是免疫应答的主要效应细胞。

在本研究中，对哮喘患儿外周血中DCs 及两种亚型cDCs、pDCs 的数量及炎症因子等进行了检测，与哮喘控制组和对照组比较，新诊断组pDC 数量高于控制组和对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；控制组与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。新诊断组cDC 数量与控制组和对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。新诊断组的IL-12 均低于控制组和对照组，EOS%、IgE 高于控制组和对照组，且控制组的IL-12水平低于对照租，EOS%、IgE 水平均高于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。提示在新诊断组哮喘患儿中，外周血循环中的pDCs 分泌IL-12 功能是降低的，代偿性引起pDCs 数量增加，而cDCs 则变化不明显，从而导致pDCs/cDCs 比值发生改变，导致免疫漂移。cDCs 和pDCs 的相对平衡在Th1/Th2 免疫应答中是决定性关键因素。有研究显示，cDCs 分泌的IL-12能特异性地诱导Th0 向Th1 分化，而且最关键的是细胞因子，还可降低IL-5 水平，减少EOS 在支气管的浸润，抑制气道肥大细胞释放炎症介质，抑制诱发的气道高反应性等作用［15］。故哮喘患儿DC 细胞亚型漂移，IL-12 的降低使Th0 向Th1 分化减少，向Th2 分化增加，Th1/Th2 免疫功能比例失衡，EOS%、IgE 显著升高，而进一步造成气道慢性炎症和气道高反应性，最后导致哮喘发作［16，17］。

综上所述，pDC/cDC 亚型漂移引起Th1/Th2 免疫功能失调，pDC 特性和功能异常启动免疫炎症反应可能在支气管哮喘的发生发展中产生了重要作用。