黄擎擎 王丹凤 马 毅 田力平

(1江苏省原子医学研究所附属江原医院，无锡 214063；2苏州大学附属第一医院，苏州 215006)

葫芦素B(Cucurbitacin B)是从葫芦科植物中提取的四环三萜类化合物，是葫芦素家族中含量最丰富的成员，具有广泛的药理活性，如抗炎、保肝、提高机体免疫力等作用[1-2]。葫芦素B在体内外实验均被证实可发挥有效抗肿瘤活性，且无明显毒副作用。本文将探讨葫芦素B对激素受体阳性的人MCF-7乳腺癌细胞生物学行为的影响及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人MCF-7细胞购自中国科学院上海细胞库。纯化葫芦素B购自中国舜博生物工程科技公司，溶剂为二甲基亚砜(DMSO)，本实验所有抗体购自Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1细胞培养 DMEM培养基(美国纽约格兰德岛Gibco公司，其中含链霉素100U/ml、青霉素100μ/ml以抑制杂菌生长，外加10%胎牛血清适量)培养细胞，保持温度37℃，CO2体积分数5%。当细胞处于对数生长期时胰酶消化、备用。

1.2.2SRB实验 备用细胞制成单细胞悬液。96孔培养板上各滴加100μl细胞悬液，37℃，5%CO2，培养24h。去上清液，实验组分别加入20μM、50μM、100μM葫芦素B，对照组加入等体积的DMSO。每个药物浓度组做5个平行孔，经48h充分反应后三氯醋酸(中国舜博生物工程科技公司)固定。去离子水洗涤，干燥后加入0.4% SRB(中国舜博生物工程科技公司)充分反应。10mmol/L的Tris溶液(中国舜博生物工程科技公司)加入经醋酸洗涤的溶液中，以获取结合型SRB。空白孔吸光度(OD)值设为零，利用酶标仪(Amersham公司)在490nm波长下测量各组标本OD值并计算抑制率。抑制率(%)=1-[(药物组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)×100%]

1.2.3Hoechst 33258凋亡实验 取备用细胞以4×104个/孔的密度接种于覆灭菌盖玻片的6孔培养板内过夜。……