何盛梅， 李昌亚， 孟令辉， 赵厚育

(贵州医科大学附属医院 耳鼻咽喉科， 贵州 贵阳 550004)

喉癌是一种发生于头颈部的常见肿瘤，由于发病位置特殊，可影响患者发音、呼吸和吞咽功能，因此严重影响患者的生活质量[1]。除了手术治疗，大部分喉癌需要结合化疗，其中顺铂是喉癌等头颈部鳞癌的一线化疗用药，具有便宜、高效等特点[2]。然而，喉癌细胞对顺铂(cisplatin，DDP)的敏感性下降，直接影响治疗效果，但目前癌细胞对DDP耐药机制尚不清楚[3]。凋亡是化疗药物诱导肿瘤细胞死亡的主要模式，凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins, IAPs)家族在调节肿瘤细胞的凋亡敏感性方面起着核心作用[4]。Livin是IAP家族新成员，具有强大的抗凋亡能力，特异性表达于人的胚胎组织及许多肿瘤组织中，在正常成人组织中低表达或无表达，是当今肿瘤治疗的一个新靶点[5]。课题组前期研究中发现，Livin在喉癌中高表达且和不良预后相关[6]，因此本研究通过RNAi沉默Livin的表达而获得喉癌细胞对DDP的敏感度提升，可能为喉癌增敏治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞与主要试剂 人喉鳞癌Hep2细胞株购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库； RPMI-1640培养基和Trizol RNA提取试剂(美国Gibco)，Lipofectamine 2000(美国Invitrogen)，小鼠抗人β-actin单克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology)，鼠抗人Livin单克隆抗体(美国Chemicon)，兔抗人Caspase 3多克隆抗体(武汉博士德)，噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide，MTT；美国Sigma]，洗涤缓冲液(tris buffered saline tween，TBST)和磷酸缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)由实验室配制， DDP购自山东齐鲁制药厂。

1.1.2主要仪器 台式低温高速离心机(beckMAN COULTER.INC)，蛋白半干式转膜仪(美国BioRad)，Power PAC-300电泳仪(美国Bio-Rad)，RNA/DNA定量仪(美国Pharmacia)，凝胶成像系统(日本Olympus)，磁力搅拌器(上海沪西分析仪器厂)，恒温干燥箱(上海医疗器械厂)。……