马贵兰， 谭艳， 包伦敏， 蒋红梅*

(1.贵州医科大学 医学检验学院 临床微生物学及免疫学教研室， 贵州 贵阳 550025； 2.武汉科技大学附属天佑医院 检验科， 湖北 武汉 430000)

树突状细胞(dendritic cells, DC)是参与调节免疫刺激和耐受的重要抗原提呈细胞[1-3]。近年的研究表明，DC的类型不同从而诱导T细胞分化的方向不同，使免疫反应向不同甚至相反的方向发展，如成熟DC可刺激T细胞的免疫反应性，打破机体自身免疫稳态；未成熟DC因低表达簇分化抗原80(cluster of differentiation 80，CD80)、簇分化抗原86(cluster of differentiation 86，CD86)等可诱导T细胞低反应性或失活，故被称为“耐受性DC(dendritic cells, tolDC)”[4-6]，这为诱导免疫耐受的建立提供了新方向。寡核苷酸诱骗剂(oligodeoxynucleotides decoy, ODN Decoy)策略是近年来倍受关注的抗基因策略[7]。ODN Decoy与机体内一种不可或缺的核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)结合[8]，导致NF-κB促进靶基因激活被阻止，从而抑制DC成熟而获得tolDC，且抑制作用具有很高的稳定性[9]。临床上用免疫抑制剂抑制DC成熟的作用弱且不完全，又容易被细胞因子所逆转，而转基因技术往往因腺病毒等载体对DC的刺激作用而抵消导入基因的效应[7]，与免疫抑制剂、转基因技术抑制DC成熟的策略相比，NF-κB寡核苷酸诱骗剂(oligodeoxynucleotides decoy，ODN Decoy)抑制DC成熟所具有的明显优势，然而DC属于高分化的非增殖细胞，不能进行传代培养，其生存时间比较短，数量极少，体外往往难以获取到足够数量的高质量DC[10]。因此，本研究旨在通过NF-κB ODN Decoy诱导培养tolDC，并对其进行纯度、成熟度、细胞活力鉴定以及形态和耐受性分析，为后续研究tolDC在机体中免疫抑制机制奠定良好基础。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1动物来……