郭洁梅，陈秀明，陈 鹏，肖 艳，毛 骁，苏友新*

（1.福建卫生职业技术学院，福建 福州350101；2.福建中医药大学，福建 福州350122；3.福建中医药大学附属康复医院，福建 福州350003）

膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是以关节软骨退变、滑膜炎症为主要病理改变的退行性疾病。已有研究表明Wnt/β-catenin信号通路的激活与软骨退变的发生、发展密切相关［1］。课题组前期对大鼠膝关节软骨细胞的体外研究也证实，经白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的退变软骨细胞可抑制Ⅱ型胶原蛋白的表达水平，并伴有β-catenin蛋白表达增多，糖原合成激酶-3β（GSK-3β）mRNA表达减少［2］，提示经IL-1β诱导的退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路被激活。课题组针对KOA的临床效验方—壮骨健膝方能提高经IL-1β诱导的退变软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的表达，降低β-catenin蛋白的表达，提高GSK-3βmRNA的表达［3］，表明该方可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活起到保护关节软骨的作用。Dickkopf相关蛋白1（Dkk-1）、分泌型卷曲相关蛋白3（sFRP-3）是Wnt/β-catenin信号通路活动的抑制因子［4-5］。本实验通过壮骨健膝方含药血清对经IL-1β诱导的大鼠膝关节退变软骨细胞进行干预，观察不同时间段Dkk-1、sFRP-3蛋白表达水平的变化，探讨壮骨健膝方是否通过调控Dkk-1、sFRP-3这两个蛋白的表达水平，抑制Wnt/β-catenin信号通路被激活，进一步研究壮骨健膝方保护关节软骨的可能分子机制。

1 实验材料

1.1 实验动物40只清洁级2周龄SD大鼠，雌雄各半，用于血清的制备；5只清洁级2周龄雄性SD大鼠，用于体外生长良好的第三代软骨细胞的取材。大鼠均由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物许可证号：SCXK（沪）2007-0005。大鼠在福建中医药大学动物实验中心饲养，动物环境合格证号：SCXK（闽）2009-0001。……