阮怀玉 廖小婷 曾彬

(武汉大学人民医院心内科 武汉大学心血管病研究所 心血管病湖北省重点实验室，湖北 武汉 430060)

近年来，氧化应激在心血管疾病发展过程中的重要作用越来越受到关注，研究[1]表明氧化应激可引起心肌缺血、心肌缺血再灌注损伤以及心肌重构等一系列病理过程的发生，最终导致心肌细胞坏死和凋亡。心肌细胞是高度分化的细胞，不可再生，因此干预氧化应激和减少心肌细胞凋亡成为心血管疾病治疗的研究热点。最新研究发现，miRNA是心血管疾病重要的调控因子[2]，并且也已证明多种miRNA参与心血管疾病的发生和发展，如miR-26[3]、miR-21[3-4]和miR-221[5-6]等。近年来研究发现miR-19b在心力衰竭中低表达[7]，并可通过抑制心肌细胞凋亡和靶向BCL2L11/BIM来逆转缺血性心力衰竭[8]，也与心肌梗死的发生密切相关[9]，但其对心肌细胞氧化应激的作用还少见报道。因此，本研究将探讨miR-19b在H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤中的保护作用及具体机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

大鼠心肌细胞H9c2由湖北省心血管病重点实验室提供，高糖DMEM培养基和胎牛血清购自Gibco公司，CCK8溶液和胰蛋白酶等购自Sigma公司，Lipofectamine 2000和Trizo试剂盒等购自Invitrogen公司，AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒购自天津三箭技术有限公司，超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 H9c2细胞的培养

(1)从-80 ℃冰箱中取出细胞迅速放入37 ℃水浴快速解冻，加入5 mL培养基重悬细胞并离心5 min。(2)弃去上清液，加入5 mL培养基重悬细胞接种于培养皿内，用含10%胎牛血清的DMEM培养液在37 ℃、5%CO2条件下培养。……