陆 英， 袁 青， 邝丽华， 赵才翰， 张祥忠

（中山大学附属第三医院 1输血科，2血液科，广东广州510630）

血小板输注用于预防和治疗因血小板数量减少或者功能异常导致的出血，是临床上挽救生命的重要治疗手段之一。目前血小板普遍采用在血小板震荡仪于室温（20～24℃）中保存，保存期为3～7 d 不等，我国血小板的室温保存期为5 d［1］。由于血小板的保存时间短，因此临床上时常存在血小板供不应求的情况。那么如何延长血小板的保存期是大家长期以来研究的科学问题。4℃和冷冻保存法是研究比较多的2种方法［2-4］。

比较不同温度储存血小板功能的实验，比如体外灌注法研究血小板血栓的形成［5］，实时观察血小板在体内止血过程等［6］，通常需要先用荧光标记物标记好血小板，然后再在荧光显微镜下观察并拍摄图像，最终通过计算机分析图像的荧光强度来比较不同温度储存下血小板功能的差异。由于荧光强度是分析结果的依据，因此必须保证实验所用的荧光标记物对不同温度下保存的血小板具有相似的标记效果。本研究比较5-氯甲基荧光素二乙酸酯（5-chloromethylfluorescein diacetate，CMDFA）、碘代3，3'-二己氧基羰花青［3，3′-dihexyloxacarbocyanine io⁃dide，DiOC6（3）］及抗血小板膜糖蛋白（glycoprotein，GP）Ibβ抗体衍生物（anti-GPIbβ derivative）标记不同温度下储存的血小板的效果，以期找出一种受温度因素影响较小的血小板荧光标记物。

材料和方法

1 试剂

Annexin V-Alexa Fluor 647 购自Biolegend；兔抗小鼠CD62P抗体购自BD；Cell TrackerTMCMFDA Dye购 自Thermo Fisher Scientific；DiOC6（3）Dye 购 自AAT Bioquest；抗GPIbβ抗体衍生物购自Emfret。

2 血小板的获取和保存

C57 小鼠购自广东省医学实验动物中心。眼眶静脉取血法获取15 只C57 小鼠的全血，300 ×g 离心7 min，分离出上层的富血小板血浆，计数血小板，调整血小板浓度为1×1012/L。……