肖宗懿， 王小燕， 易 寒， 宋 娟， 安雨轩， 王寿勇

（重庆医科大学附属儿童医院麻醉科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆400014）

肺微血管内皮细胞损伤是体外循环所致急性肺损伤（acute lung injury，ALI）的基本病理生理改变之一，它继发于缺血再灌注和高炎性因子背景之下［1］。细胞焦亡是一种程序性细胞死亡过程，它区别于其它程序性细胞死亡方式的最显著特点是伴随强烈炎症反应［2］。研究表明，缺血再灌注是诱发多种细胞发生焦亡的有效外界刺激因素［3-6］，但体外循环相关性肺损伤中是否涉及微血管内皮细胞焦亡机制，目前尚不清楚。本研究拟以人肺微血管内皮细胞（human pulmo⁃nary microvascular endothelial cells，HPMVECs）为研究对象，通过建立氧糖剥夺/复氧（oxygen-glucose de⁃privation/reoxygenation，OGD/R）细胞模型，来模拟体外循环中HPMVECs的缺血再灌注过程，观察OGD/R是否诱发细胞焦亡，为进一步理解体外循环所致急性肺损伤发生机制提供新的理论参考。

材料和方法

1 细胞株和主要试剂

原代HPMVECs 购自武汉普诺赛生命科技有限公司。ECM 完全培养基购自Sciencell；无糖DMEM培养基购自迈晨科技有限公司；ELISA 试剂盒购自欣博盛公司；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）试剂盒购自南京建成；MTT试剂盒购自北京索莱宝公司；Trizol 购自Invitrogen；逆转录试剂盒购自MedChemExpress；兔抗人caspase-1多克隆抗体、兔抗人核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleo⁃tide-binding oligomerization domain-like receptor pro⁃tein 3，NLRP3）多克隆抗体、兔抗人含caspase 募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment do⁃main，ASC）多克隆抗体和鼠源GAPDH 抗体均购自Proteintech；山羊抗兔Ⅱ抗和兔抗鼠Ⅱ抗购自成都正能生物；……