张志发， 朱梦娇， 周志强， 王学仁

（华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科，湖北武汉430030）

前列腺癌是成年男性常见的恶性肿瘤之一，其生长和功能高度依赖雄激素，雄激素水平愈高，细胞的增殖能力也愈强［1］。雄激素剥夺治疗、抗雄激素等相关治疗是目前的主要治疗手段。但随着病程的延长，绝大多数雄激素依赖性前列腺癌最终都会进展为雄激素非依赖性前列腺癌，导致后期治疗效果不佳。因此，深入研究雄激素在前列腺癌中的功能对了解前列腺癌的发病机制至关重要。阿片类生长因子受体（opioid growth factor receptor，OGFr）是内源性阿片类肽OGF 的特异性受体，与其他经典的阿片类受体无结构上的同源性［2］。OGFr 在正常表皮细胞［3］及肿瘤细胞［4］中均有表达，在调节伤口愈合、细胞增殖、血管形成以及细胞周期等方面发挥着重要作用［5-7］。近期Yu 等［8］研究证实，在雄激素依赖的人前列腺癌LNCaP 细胞增殖过程中OGFr表达下调，但对OGFr 是否参与了LNCaP 细胞增殖过程及发挥何种功能尚不清楚。因此，本研究拟通过体外构建高表达OGFr 的LNCaP 细胞模型，初步探讨OGFr 在雄激素诱导LNCaP 细胞增殖过程中的作用及可能的分子机制。

材料和方法

1 材料

LNCaP 细胞系购自中科院上海细胞生物医学研究所。DMEM、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）和青-链霉素（Hyclone）；二氢睾酮（dihydrotestosterone，DHT）、Trizol 和RIPA 裂解液（Sigma）；逆转录试剂盒和KOD SYBR®qPCR Mix（TOYOBO）；真核表达质粒pcDNA3.1-OGFr 及pcDNA3.1 空白质粒（Ambion）；LipofectamineTM2000 Reagent和Opti-MEM I还原型血清培养液（Gibco）；CCK-8 试剂盒（Sigma）；Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒和细胞周期试剂盒（江苏凯基生物技术有限公司）；鼠抗人细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2，CDK2）、细胞周期蛋白E（cyclin E）和p21 抗体（Santa Cruz）；……