毛雨晓, 郑蒙蒙, 刘桂真, 安保礼, 康经武*

(1.上海大学理学院化学系,上海 200444;2.中国科学院上海有机化学研究所,生命有机化学国家重点实验室,上海 200032)

蛋白质磷酸化是生命过程中调节和控制蛋白质活力和功能的最基本、最普遍、最重要的机制[1,2]。在生物体中只有大约1%～2%的蛋白质会发生磷酸化修饰,在质谱检测中会受到大量非磷酸化肽段的干扰[3]。发展富集磷酸化肽段的技术是提高磷酸化蛋白分析的重要实验方法[4]。免疫沉淀法[5,6]、固定金属亲和色谱法[7,8]和金属氧化物亲和色谱法[9,10]是磷酸化蛋白分离和富集最为常见的方法。由于不同特性的纳米复合材料能够选择性结合磷酸化多肽和磷酸化蛋白,因此纳米复合材料常用于磷酸化蛋白的分离与鉴定[11,12]。将磷酸化蛋白的分离与富集技术和生物质谱技术联合使用是分析磷酸化蛋白的常用技术。磁性纳米粒子经常用于富集磷酸化蛋白和磷酸化肽段[13-16]。

免疫印迹(Western Blot)是分子生物学和生物化学中常用的一种实验方法,其基本原理是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯膜上,然后用特异性抗体检测某特定蛋白质的检测技术。采用免疫印迹分离和鉴定磷酸化蛋白时,需要借助磷酸化抗体对磷酸化蛋白进行特异性识别,且需使用二抗放大检测信号[17]。但是,磷酸化抗体价格昂贵,难以保存,而且不同批次之间的重现性不好。因此,亟须发展一种制备过程简单、容易保存、成本低廉、对磷酸化蛋白具有特异性识别的纳米发光材料代替磷酸化抗体。……