高 茜 赵红霞 李忠春 孟宪良

癫痫是中枢神经系统的慢性、反复发作性短暂功能失调综合征，其人群患病率仅次于脑卒中[1]。多数患者的病情经药物治疗后基本可得到控制，但仍有约20%的患者长期反复发作[2-3]。因此，研发有效的抗癫痫治疗药物具有重要临床意义[4]。微核糖核酸(microRNA，miRNA)为长度在19～25个核苷酸之间的短链、非编码、内源性小RNA，其可靶向结合mRNA的3’非翻译区(UTR)序列，调控基因转录的稳定性和翻译效率[5]。Simonato等[6]发现，miRNA参与的调控机制在癫痫疾病的防治中扮演重要角色。癫痫患者脑内的氧化应激反应活跃，癫痫发作时自由基(free radical，FR)含量显著增加，远超过机体对FR的清除能力。大量的FR可以直接使脂质、蛋白质和脱氧核糖核酸(DNA)等大分子物质发生氧化损伤，从而破坏细胞膜和其他细胞结构。当脑组织受到FR和内源性毒素等攻击时，核转录相关因子2(nuclear transcription-related factor 2，Nrf2)与其特异性受体KELCH样ECH相关蛋白1(Keap-1)解除偶联，半衰期明显延长，转位进入细胞核，与抗氧化反应原件(antioxidant response element，ARE)结合后诱导抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶基因的表达。因此，考虑癫痫发生的相关机制可能与Nrf2-ARE信号通路的激活相关。本研究旨在探讨miRNA-221在小鼠癫痫神经元模型中的调节作用及其对上述信号通路的调控机制。

1 材料与方法

1.1 实验细胞与试剂 小鼠神经元细胞株购自上海康朗公司。LipofectamineTM2000转染试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)蛋白质定量试剂盒、反转录试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司。miRNA抽提试剂盒、人谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒、聚偏二氟乙烯(PVDF)印迹膜、电化学(ECL)发光液和放射免疫沉淀法(RIPA)蛋白质裂解液均购自上海碧云天生物技术有限公司。……