吴 毛 王建伟 冯 骅 尹 恒 华 臻 俞云飞

（江苏省无锡市中医医院，江苏 无锡 214000）

骨折是以骨小梁组织连续性破坏为特点，骨组织的修复与重建是在多种组织因子和细胞参与下共同完成。中医学将其归属到“骨折病”范畴，认为骨折必损伤经脉气血，致血脉离经妄行、血瘀留滞。“刘氏骨伤”作为无锡市非物质文化遗产［1］，经多代传人总结形成本院经验方—刘氏正骨方，具有“活血祛瘀，接骨续筋”功效，且临床疗效显著［2-3］，但有关其促进骨折愈合的具体作用机制尚不明确。近年来有关中药促进骨折愈合多集中于调节骨代谢、促进成骨细胞形成等方面，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）作为骨组织干细胞主要来源，可以在BMP、Wnt信号通路等多种生物信息网调节下促成骨分化［4］。现代研究表明［5-6］，Wnt信号通路及其下游靶基因Rnux2、OSX是调节成骨分化的关键路径。硬骨素（Sclerostin/SOST）可以通过抑制Wnt信号通路从而负向调节成骨代谢［7］。我们前期研究发现［8］，通过siRNA抑制Sclerostin基因表达可以促进BMP-4体外诱导BMSCs成骨分化过程。因此，本研究依托无锡市科教强卫项目（ZDRC025），设计实验探讨刘氏正骨方对BMSCs体外成骨分化的影响及其可能作用机制，为刘氏正骨方治疗骨折病提供理论基础，并为其应用于治疗骨折提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

DMEM（Hyclone，美国）；胎牛血清（GlBICO，美国）；胰蛋白酶（Sigma，美国）；CCK-8试剂盒（Abcam，美国）；茜素红（Sigma，美国）；总蛋白提取试剂盒（上海碧云天公司，中国）；一抗：Col1A2、OCN、OPN、Scleros⁃tin、LRP5、Runx2及GAPDH均为美国Abcam公司产品。二抗：山羊抗兔抗体和马抗小鼠抗体为美国CST公司产品；……