（广医科大学第一附属医院胃肠腺体外科，广西 南宁 530021）

1 型糖尿病（T1DM）由于自身β 细胞免疫损伤被破坏，导致胰岛素绝对分泌不足[1]。而胰岛移植是可以将胰岛素水平维持在生理上适当范围内的糖尿病治疗方式[2]。2000 年Edmonton 方案提出以及在临床上的成功应用，使胰岛移植在治疗糖尿病方面得到广泛关注[3]。本研究结合本课题组夏小林等[4]前期小鼠胰岛肾被膜移植研究的基础上，采用胆管逆行灌注联合胰腺原位灌注射改良了胰腺分离消化方法，在移植过程中采用低位肾被膜开口移植技术，旨在探索新的胰岛移植操作方法与方法，并对提取的胰岛细胞功能及移植效果进行评价。

1 材料与方法

1.1 实验动物和主要试剂

1.1.1 实验动物 选择SPF 级，8～10 周龄的C57BL/6J雄性小鼠60 只，由广西医科大学动物试验中心提供。

1.1.2 主要试剂与仪器 Hanks 缓冲液与D-Hanks 缓冲液（美国Boster 公司）；血糖仪(美国欧姆龙公司）；倒置显微镜（日本OLYMPUS 公司）；内径0.58 mm聚乙烯管PE50（美国Becton Dickinson 公司）；胶原酶V、双硫腙（Dithizone，DTZ）、台盼蓝、淋巴细胞分离液（Histopaqueo-1077）及链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）购自美国Sigma 公司；RPMI-1640 培养基及胎牛血清（四季青）；小鼠胰岛素酶联免疫吸附试验（ELISA）（上海酶联公司）。主要试剂的配制：①灌注液：50000 U 肝素钠+200 U 胰岛素+Hanks 液500 ml，过滤器过滤，定pH 为7.3，4 ℃保存；②消化液：6 mg 胶原酶+5 ml 灌注液，浓度为1.2 mg/ml,现配现用；③终止液：5000 U 肝素+200 U 胰岛素+Hanks 液500 ml+50 ml 胎牛血清，经过滤器过滤，定pH 为7.3，4 ℃保存。

1.2 方法

1.2.1 胰岛的分离 ①胰腺的灌注：1%戊巴比妥钠按0.01 ml/g 腹腔注射麻醉，酒精消毒，腹部切口打开腹腔，剪断胸骨和膈肌，翻转肝脏至胸腔内，便于充分暴露肝门。……