张可欣，杨思熙,王丽娜，刘金霞，邢恩鸿

(1.承德医学院 病原生物学实验中心，河北 承德067000;2.承德医学院附属医院 妇科，河北 承德067000)

乳头瘤病毒(HPV)是一种乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒，目前已发现140余种亚型[1]。不同亚型的 HPV感染所导致的后果也不同，低危型主要可导致寻常疣和良性病变，而高危型主要可导致宫颈上皮内瘤病变或者是宫颈癌[2]，最新研究表示， HPV感染也与动脉粥样硬化和口咽癌的形成有关[3-4]。因此，早期识别HPV感染，对预防可能发生的疾病有着重要的指导作用。

目前，临床上对于 HPV的诊断手段主要以斑点杂交或原位杂交为主[5-6]，这种方法需要配套的昂贵设备才能完成，不适用于基层医院或社区现场进行 HPV的筛查和分型。环介导等温扩增(LAMP)技术是在2000年由日本学者 Notomi开发的一项适用于基因诊断的技术[7]，具有特异性强、结果可用肉眼判定、无需特殊装置的优点。本实验将基于该技术对HPV16、18、52、58亚型临床标本进行检测并分型，旨在探讨LAMP在临床的使用前景。

1 材料与方法

1.1 试剂

Bst DNA聚合酶和10X reaction buffer购自美国NEB公司，钙黄绿素购自Sigma公司，100 bp DNA Marker购自TaKaRa公司，PCR Mix购自TIANGEN公司。

1.2 标本采集

收集承德医学院附属医院2018年8月-2018年10月部分就诊患者宫颈脱落细胞悬液共155例，其中4例经该院检验科使用潮州凯普公司HPV分型试剂盒检测后HPV16、18、52、58感染，其余151例未知亚型。

1.3 DNA模板制备

DNA模板制备将标本混合均匀后，15 000 r/min离心5 min，弃上清，留沉淀，加入50 μl核酸裂解液，100℃煮沸5 min，-20℃保存备用。

1.4 LAMP特异性引物

根据GenBank公布的HPV16亚型(GenBank登录号： EU869318.1)、18亚型(GenBank登录号： KY457840.1)、52亚……