王鑫瑶 邓振领 王悦

北京大学第三医院肾内科 100191

传统的转录组学检测主要对组织或者大量细胞集合体水平进行批量分析，得到的数据是多细胞基因转录的总体水平，常常掩盖了不同细胞之间的差异，很难发现在疾病发展中起重要作用的特定细胞类型。scRNA-seq在单细胞水平分析基因转录，实现对细胞类型及其亚型进行全面分类，鉴定出新的细胞类型及特异性基因，还可以通过拟时序(pseudotime)分析推断出发育过程中细胞的分化轨迹和细胞亚型的演化过程，这些均有助于揭示疾病的发病机制，为临床诊断和治疗提供新思路。本文在阐述scRNA-seq技术在肾脏领域最新研究进展的基础上，重点对常见的多种肾脏病肾组织中免疫细胞scRNA-seq的研究进展进行综述。

一、scRNA-seq技术

scRNA-seq技术主要包括单细胞悬液制备、单细胞分离、文库构建和数据分析4个环节。

1.单细胞悬液制备 制备高质量的单细胞悬液是scRNA-seq成功的关键。对于血液等天然单细胞悬液可使用梯度离心法进行单细胞悬液制备[1]，而对于肾脏等固体组织需要进行网搓和研磨等机械处理方法和消化酶处理，不同组织解离单细胞所需要的消化酶、消化时间、温度和浓度不同[2]。在细胞解离过程中加入脱氧核糖核酸酶Ⅰ可减少因细胞裂解而导致的细胞聚集[2]，将单细胞悬液经过滤网或过滤器可以去除细胞团、细胞碎片和纤维等杂质。此外，单细胞悬液制备要求及时、快速，以免造成RNA降解和应激相关基因活化[3]。……