杨 锋，徐 佳，仇国辉，杨志玲

(湖南省人民医院 药学二部，湖南 长沙 410002)

膀胱癌(bladder cancer)一般采用根治术或局部切除术后辅以全身化疗的策略，但经此种方案治疗后，依然有大量膀胱癌患者在5年内复发[1]。造成这种现象的主要原因之一是膀胱癌化疗耐药性的产生而导致化疗药物不能彻底杀死残存的癌细胞[2]。目前，虽然对膀胱癌细胞的耐药表型相关的分子机制进行了大量研究，但化疗耐药的关键决定因素仍不完全清楚。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)是膀胱癌患者全身化疗的常用化疗药物之一[3]。因此，寻找潜在的能逆转5-FU耐药性的生物标志物和治疗方法能降低膀胱癌患者复发率。

一些miRNAs在肿瘤的生长、死亡、转移和化疗耐药中发挥重要的调控作用[4]。miR-491-5p在胃癌和结直肠癌等肿瘤中可作为抑癌因子[5-6]，且有报道miR-491在胃癌和骨肉瘤中可抑制化疗多药耐药性[7-8]。但关于miR-491-5p在膀胱癌中对5-FU耐药的作用和机制尚未见报道。因此，本实验主要研究miR-491-5p在膀胱癌细胞中对5-FU的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂： DMEM培养基和胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(Gibco公司)；Trizol试剂和Lipofectamine 3000试剂(Thermo Fisher Scientific公司)；CCK-8试剂盒、RIPA裂解液、Annexin V-FITC/PI试剂盒、β-actin抗体和HRP耦合的二抗(江苏碧云天研究所)；5-FU粉剂(Sigma公司)；miR-491-5p抑制剂、miR-491-5p模拟物和miR-NC质粒(上海吉凯基因公司合成)；反转录试剂盒、SYBR Green荧光定量PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)；AKT、p-AKT、STAT3和p-STAT3抗体(Cell Signal Technology公司)。

1.1.2 细胞与组织： 人膀胱癌细胞系EJ(美国典型培养物保藏中心)。纳入30例行膀胱癌根治术前接受过以5-FU为基础的全身化疗方案的复发性膀胱癌患者，收集切除的膀胱癌组织，其中9例化疗敏感组织，21例化疗耐药组织。……