冯旭芳， 陶明江， 何贤海， 郎达波， 陆安法， 程振涛

(1. 贵州省德江县动物疫病预防控制中心，贵州德江565200； 2. 德江县畜牧业发展中心，贵州德江565200； 3. 铜仁市动物疫病预防控制中心，贵州铜仁554300； 4. 贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025)

程振涛(1979—) ，男，博士，副教授，研究方向： 动物病原病理学研究。E-mail： chengzhentao@sohu.com

贵州省德江县某林下养鸡场2020年5月23日从某种鸡场购进1月龄鸡6 000羽，6月7日鸡出现大量死亡，至6月16日共死亡4 000多羽，死亡率达66.67%。病鸡临床症状表现为精神沉郁，消瘦，拉浅黄色水样粪便(部分粪便带血)，有的急性死亡。为确诊病因，采集病料进行病原检测。

1 材料与方法

1.1 病料采集病死鸡的心包液、肝脏作为检测病料。

1.2 主要试剂柱式DNA核酸提取试剂盒(生产批号：YDNA-TQ 20190713P，购自哈尔滨元亨生物药业有限公司)，PCR 扩增所需试剂[购自宝生物工程(大连)有限公司]。

1.3 病理剖检解剖2羽发病鸡和2羽病死鸡，观察病理变化。

1.4 球虫卵囊镜检刮取少量病变肠黏膜放置在载玻片上，滴生理盐水1滴，加盖玻片，在显微镜下观察。

1.5 安卡拉病毒PCR检测提取病死鸡的组织样品总DNA，应用 PCR方法对目的基因安卡拉病毒(FAdV-4)基因进行扩增。PCR反应体系25 μL：2×TaqPCR MasterMix 12.5 μL，10 μmol/L上、下游引物(FAdV-366 bp-F：CCCAAGCTTATGTCGGCCCTAATC GCCT；FAdV-366 bp-R：TGCTCTAGAGGCCAAAGT ATCGTCATCGATGAGCAG)各1 μL，DNA模板2 μL，dd H2O 8.5 μL。反应条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，59 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，共35个循环；72 ℃延伸10 min。 取 PCR产物10 μL于1%琼脂糖凝胶进行电泳鉴定(预扩增片段 366 bp) 。

2 结果

2.1 病理变化病理剖检发现心包积液，肝、脾肿大(部分肝黄染)，肾肿大，回肠、直肠弥散性出血，鼻孔和喉气管有黏液。

2.2 镜检结果通过显微镜观察发现病变肠黏膜中含有卵圆形球虫卵囊，说明存在鸡球虫感染。……