靳立振，赵永华，于巧青

作者单位：廊坊市人民医院重症医学科，河北 廊坊065000

肺纤维化是一种肺间质性疾病，研究显示上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transitions，EMT）是引发肺纤维化的主要原因，EMT 发生过程涉及转化因子-β1（transforming growth factor-β1，TGFβ1）等多种细胞因子，TGFβ1 可通过诱导EMT 发生从而促进肺泡上皮细胞转化为成纤维细胞，同时可通过抑制蛋白水解酶生成而促使细胞外基质沉积从而引发肺纤维化。研究表明微小RNA（microRNA，miRNA）在TGFβ1 干预后的肺泡上皮A549 细胞中表达异常，并可能参与肺纤维化形成过程。因而探寻新型miRNA 分子并探究其在肺纤维化形成过程中的作用机制具有重要意义。研究表明微小RNA-212（microRNA-212，miR-212）表达异常与炎症反应、免疫缺陷疾病及慢性肾病等相关疾病发生发展密切相关。miR-212 还可促进二氧化硅（SiO）诱导的EMT 过程。但miR-212 在肺纤维化发生过程中的作用机制尚未可知。Targetscan 预测显示TOB2 可能是miR-212 的靶基因，TOB2 过表达可抑制肺上皮细胞EMT 过程及迁移能力。但miR-212是否可通过调控TOB2 表达从而参与肺纤维化过程尚未可知。本研究自2018 年3 月至2019 年3 月在TGFβ1 干预A549 细胞中检测miR-212、TOB2 的表达变化，初步分析其在肺纤维化发生过程中的可能作用，为进一步探讨肺纤维化形成机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

人肺泡上皮A549 细胞（美国ATCC 公司）。TGFβ1（美国PeproTech 公司）；RPMI 1640 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶（均为美国Hyclone 公司）；Lipofectamine2000（美国Thermo Fisher公司）；miR-212 抑制剂（anti-miR-212）及其阴性对照（anti-miR-con）、miR-212 模拟物（mimics）及阴性对照mimic NC 序列（miR-con）、TOB2 小干扰RNA（si-TOB2）及无意义序列（si-con）（均为上海吉玛制药技术有限公司）；甲基噻唑基四唑（methylthiazolyl tetrazolium，MTT）（上海泽叶生物科技有限公司）；……