鹅星状病毒、鹅细小病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用
2021-03-01朱庆贺兰世捷冯万宇黄宝银沈思思史同瑞
苗 艳,朱庆贺,陈 亮,兰世捷,冯万宇,李 丹,黄宝银,沈思思,史同瑞
(黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,黑龙江齐齐哈尔 161000)
雏鹅痛风是一种由新型鹅星状病毒(Goose astrovirus, GoAstV)引起的以内脏尿酸盐沉积为主要特征的疾病[1],4~21日龄雏鹅易感,发病率80%左右,致死率30%~50%[2-4]。该病首次于2017年爆发,近年来在黑龙江、辽宁、江西、湖南、福建、河北、江苏、安徽、山东、河南、广东、四川等省都有爆发该病的报道,目前尚无有效疫苗可用,给养鹅业造成巨大经济损失[5-7]。鹅细小病毒病是一种由鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)引起的急性、接触性、致死性疾病,以发生渗出性肠炎为主要特征,主要侵害4~20日龄雏鹅。该病传播速度快,发病率和致死率都较高,对养鹅业威胁巨大,严重限制了养鹅业的发展,目前中国、英国、瑞典等多个国家和地区都对该病进行了报道[8-10]。
GoAstV和GPV是对水禽养殖威胁严重的两种病毒,目前已有二者混合感染的报道[11-12],因此急需一种能够快速、特异鉴别诊断这两种病毒的方法用于流行病学调查和疾病防控。目前用于检测GPV的方法有ELISA、TaqMan PCR和环介导等温PCR等[13-15];用于检测GoAstV的方法主要是TaqMan PCR[16]。PCR检测方法较ELISA、TaqMan PCR和环介导等温PCR等检测方法具有简单、易操作、检测时间短、成本低等特点,而且也具有较高的特异性和敏感性;而双重PCR可在同一体系中同时对两种病原进行检测。因此,本研究根据GoAstV和GPV基因序列保守区域设计合成了两对特异性扩增引物,对PCR反应体系及反应条件进行优化,研究建立了一种可同时检测GoAstV和GPV的双重PCR检测方法。……
