王 凌，贺玉龙，兰书焕，谢翼飞

(1.西南交通大学 地球科学与环境工程学院，成都 611756; 2.中国科学院成都生物研究所 环境微生物四川省重点实验室，成都 610041)

前 言

本实验从河道底泥、土壤、污泥等环境中筛选得到高效反硝化菌，对其进行16SrDNA测序鉴定种属。选取火山石、沸石、巴比伦、生物球作为生物填料，将得到的菌株固定在生物填料上，考察不同固定化反硝化生物填料对实验配制的城市生活污水处理厂二级出水的深度脱氮能力。

1 材料与方法

1.1 菌株筛选、固定化

菌株筛选：从不同环境得到的泥样分别称取2 g污泥置于灭菌后的富集培养基中富集，二次富集后菌液采用稀释涂布法涂布至固体培养基，平板静置于30℃恒温培养箱，培养至长出明显菌落，待长出菌落后，挑取形态大小各异的菌落在新的固体培养基平板上三次划线纯化。将纯化后的菌株接种至30 mL液体培养基中活化3 d，再将其转接至灭菌过的200 mL液体培养基中培养，2 d后取样测定硝态氮浓度，得到具有反硝化能力高的菌株，反硝化性能最高的菌株作为后续实验研究。反硝化培养基成分如下(g/L)：C6H1206·H2O 5.5、KNO32.0、K2HPO4·3H2O 1.3、KH2PO40.5、MgSO4·7H2O 0.2，微量元素[6]2 mL，pH为7.0～7.2。

菌株鉴定:按照OMEGA的E.Z.N.ATM Mag-Bind Soil DNA Kit 试剂盒提取方法提取DNA，提取后保存于冰箱-20℃。再以提取得到的DNA为模板，细菌通用引物27F和1492R(27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1492R:5′-GGTTACTTGTTACGACTT-3′)为扩增上游引物和下游引物进行PCR扩增。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，与maker比较得到单条带后再送至上海生工生物有限公司进行基因测序。

图1 不同填料的外貌结构

图2 固定化装置

1.2 实验方法

表……