抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立
2021-03-01王晓瑞邱红玲王寿利朱海华
王晓瑞,邱红玲,王寿利,朱海华,周 莉,平 洋,谭 静,王 永,王 慧,,*
(1.河南省商业科学研究所有限责任公司,河南 郑州 450002;2.上海交通大学医学院公共卫生学院,上海 200025;3.中国科学院上海生命科学研究所,上海 200233)
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐革兰氏阴性杆菌,广泛存在于海水及其海产品中,大量弧菌存在于海洋藻类和动物中,如虾、鱼、双壳类、血蛤和鲑鱼等[1]。人体被弧菌感染之后会导致严重的肠胃炎,目前发现的弧菌大概有46 种,其中至少有12 种弧菌与人类感染有关,包括副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、流感弧菌、溶藻弧菌等[2-8]。在弧菌科中,副溶血弧菌是许多国家引起肠胃炎的主要食源性致病菌[9-12],当人们摄入被副溶血弧菌污染的生的或未煮熟的食物时,可能会导致急性肠胃炎等相关的疾病,如腹泻、呕吐、腹部绞痛和低烧[13]。GB 29921ü 2013《食品中致病菌限量》对水产制品、水产调味品中的副溶血弧菌进行限量,具体为n=5、c=1、m=100 MPN/g(mL)、M=1 000 MPN/g(mL)。
目前用于检测副溶血弧菌的方法主要有传统检测法、聚合酶链式反应以及免疫学方法等[14]。传统检测方法对于副溶血弧菌表型鉴定通常需要结合各种生化和血清学检测的显色琼脂培养,该方法增菌时间长并且需要耗费大量人力[15]。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术具有特异性强、灵敏度高的优势,但不能有效用于常规检测[16]。免疫学方法是一种灵敏度高、操作简便的检测副溶血弧菌的方法,并且该方法不需要专门的仪器和设备[17]。夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法是食品安全检测过程中常用的方法之一,该方法由于标记酶放大检测信号的作用,因此具有较高的灵敏度,同时操作过程简单、可用于大批量样品的检测,整个检测过程可以在2 h之内完成[18-19]。……
