王华敏,宓轶群,赵媛媛,张永亮

(1.上海交通大学附属第六人民医院,上海 200233;2.河北医科大学第二医院,石家庄 050000)

膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis, KOA)是一种多发生于中老年人的慢性骨关节炎疾病,关节软骨退变、滑膜增生与炎症是该病的主要病理特征。该病具有高发病率、高增长率和高致残率。有文献研究表明前列腺素E2与KOA发病关系密切[1-2]。近年来相关研究表明KOA的发病与多条信号通路中的相关mRNA调控有关[3-4],本实验通过检测 KOA大鼠外周血清中前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)含量及滑膜组织中肿瘤抑制蛋白P53(Tumor proteinp53, P53)和促分裂原活化蛋白激酶 3 (Mitogen-activated proteinkinase kinase 3, Map2k3)mRNA的表达情况,探讨温针灸治疗KOA的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

28只健康的清洁级雄性 3月龄 SD大鼠,体质量(270±30)g,购于上海西普尔-必凯实验动物公司[生产许可证号为SCXK(沪)2013-0016]。饲养环境自然光每日光照12 h,温度18℃～22℃,相对湿度50%～70%,每笼7只,自由饮水、摄食,常规饲养1周后按随机数字表法分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组7只。实验过程严格遵守实验动物管理条例。

1.2 主要试剂和仪器

小艾炷(上海泰成科技发展有限公司),针灸针(固始公元医疗器械有限公司),美洛昔康片(7.5 mg/片,国药准字 H20020217,上海勃林格殷格翰药业有限公司),papain(P-3250,Sigma公司),EDTA、NaOH、NaCl、Na2HPO4、HCl(上海化学试剂公司),离心机(Sigma公司),MK3型酶标仪(Thermo公司),PGE2ELISA检测试剂盒(KGE004B,RD公司),RNA酶抑制剂(RG90925,Epicentre公司),SuperScriptTMⅢ逆转录酶、5×RT缓冲液(Invitrogen公司),Primer(英骏生物技术有限公司)。其他涉及的试剂设备和仪器均由上海交通大学附属第六人民医院实验中心提供。

1.3 溶液配制

木瓜蛋白酶(papain)溶液的制备[5]方法……