李盛杰，江海涛

(南京晓庄学院 食品科学学院， 江苏 南京 211171)

0 引言

霍乱弧菌(Vibriocholera)是一种在虾、蟹等水生动物中广泛存在的革兰阴性菌，具有食源性致病风险[1，2].水产品中的霍乱弧菌被摄入人体后往往可引起肠道传染病，发病急、传染性强且病死率高，对人类健康的危害极大[3，4].因此，在水产养殖过程中，提高霍乱弧菌快速、高效的检测手段，对于保障食品质量安全，维护人民生命健康，加强公共卫生防疫方面具有极其重要的意义.目前，针对霍乱弧菌检测的方法虽然很多，包括免疫检测法、生化鉴定法、实时荧光聚合酶链式反应、环介导恒温扩增(LAMP)等方法，但这些方法均无法同时解决操作烦琐耗时长、检测效率与检测灵敏度低、检测目标单一等问题[5-7].

多酶恒温核酸快速扩增技术(Multi-enzyme Isothermal Rapid Amplification，MIRA)的基本原理是在常温恒温下，重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体，在辅助蛋白和单链结合蛋白的帮助下，侵入双链DNA模板；在侵入位点形成D-loop区域，并开始对DNA双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体Rec/ssDNA解体的同时，聚合酶也结合到引物的3’末端，开始链的延伸，这个过程迅速高效地循环，从而完成目的片段超快速扩增.MIRA依靠多种功能蛋白在常温下同时作用，实现核酸的快速扩增，是能够真正实现便携式的现场快速核酸检测技术.整体反应时间短，仅为5～20 mins，设备需求低，反应温度为25～42 ℃，后续可以开发为荧光检测、胶体金试纸等快检手段.霍乱弧菌外膜蛋白ompW基……