李亚琳, 魏 睿, 史秀超

(渭南师范学院 环境与生命科学学院, 渭南 714009)

胸腺肽是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽，胸腺肽主要活性成分是由28个氨基酸组成的胸腺肽α1(Thymosin alpha 1，Tα1)。临床上常用的Tα1是从小牛胸腺分离并经提纯的有非特异性免疫效应的小分子多肽，它能诱导刺激T细胞分化和发育，维持机体免疫平衡状态，增强T细胞对抗原的反应，从而提高机体抵抗疾病的能力[1]。临床上也有用Tα1辅助治疗肿瘤如肝癌和肾母细胞瘤的报道[2-4]，然而Tα1在治疗癌症方面的研究还不是很多，其对肿瘤细胞本身的效应也不清楚。Hela细胞源自于人类宫颈癌细胞，宫颈癌是女性较为常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在女性中居第二，仅次于乳腺癌[5]。

本研究选取注射用Tα1作为肿瘤治疗试剂，以人宫颈癌Hela细胞作为研究对象。用不同浓度的Tα1处理体外培养的Hela细胞，观察其对Hela细胞生长增殖及死亡的影响，并进一步调查Tα1诱导自噬相关因子lc3的表达情况，从而探索Tα1在体外诱导肿瘤细胞死亡的机制，为Tα1抗肿瘤研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人 Hela细胞株(购于第四军医大学动物实验中心)；注射用Tα1(西安迪赛生物药业有限责任公司)；反转录酶(TaKaRa公司)；定量PCR试剂盒(TaKaRa公司)；LC3抗体(Sigma,USA)；HRP标记的山羊抗兔IgG；ECL发光液；蛋白提取试剂盒(碧云天)；lc3和β-actin引物由Invitrogen合成；ABI stepone plus实时荧光定量PCR仪；BHP9504-02化学发光仪。

1.2 方法

1.2.1 显微镜观察细胞死亡

将处于对数生长期的Hela细胞制成单细胞悬液，按1×103个/mL，接种于6孔板，培养24 h后，更换新鲜培养液并加入不同浓度的Tα1(10、20和30 μg/mL)作用48 h后，直接在显微镜下观察细胞形态。……